人肺癌細(xì)胞系；A549/EML4-ALK培養(yǎng)只能用于科研，不得用于臨床。應(yīng)用公司細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞株種類齊全：大鼠腹水癌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株。細(xì)胞狀態(tài)良好，飽滿，光澤度好，*，專業(yè)技術(shù)指導(dǎo)。歡迎廣大科研用戶！

細(xì)胞名稱  人肺癌細(xì)胞系；A549/EML4-ALK培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣　

品牌 懸浮生長(zhǎng)

特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。

培養(yǎng)條件 10%FBS

傳代方法 無(wú)

傳代情況 1：

3傳代，3-4天傳1次  

凍存條件 C5

支原體檢測(cè) 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

STR 陰性　

同工酶

染色體 未做

人肺癌細(xì)胞系；A549/EML4-ALK培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。

操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-Phospho-PDK1 (Ser241) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Donkey Anti-rabbit/FITC 熒光素標(biāo)記驢抗兔IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml

表皮膜蛋白1抗體 Anti-Emp1 0.2ml

Donkey Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的驢抗羊IgG 0.1ml

FAM3A 英文名稱： 胰腺衍生因子抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-Tau protein(Thr489) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Donkey Anti-rabbit/FITC 熒光素標(biāo)記驢抗兔IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
SCF 人干細(xì)胞因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Cyclin D3 周期素D3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NFKBIB/IKB beta 核因子κB抑制蛋白β抗體 規(guī)格 0.2ml

Human electron-transfer-flavoprotein beta polypeptide,ETFB ELISA Kit 人電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽 96T

TERT 英文名稱： 端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶抗體 0.1ml

CELA1 英文名稱： 彈性蛋白酶1抗體 0.1ml

Anti-Cyclin D3 周期素D3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

TNFRSF8 Kit Human 人 CD30 / TNFRSF8 ELISA配對(duì)抗體 ELISA

Twist2 英文名稱： TWIST蛋白2抗體抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh OST-beta 有機(jī)溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白OSTβ抗體 規(guī)格 0.2ml

Tau protein 微管相關(guān)蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

CCDC5 英文名稱： 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 0.2ml

Anti-Phospho-cdc2 (Tyr15) 磷酸化周期素依賴激酶2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
MMP-10(Human Matrix metalloproteinase 10) ELISA kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶10Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-OPN 骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh ICAM4/CD242 細(xì)胞間粘附分子4抗體 規(guī)格 0.2ml

ASMA(Human Anti-smooth muscle antibody) ELISA Kit 人抗平滑肌抗體 96T

PCDH20 英文名稱： 原鈣粘附蛋白20抗體 0.2ml

C17orf64 英文名稱： 17號(hào)染色體開放閱讀框64抗體 0.2ml

Anti-OPN 骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。