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詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人宮頸癌多藥耐藥細(xì)胞；SiHa/cDDP培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS：
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1：
3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
人宮頸癌多藥耐藥細(xì)胞；SiHa/cDDP培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-HSP-90 Beta /HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記熱休克蛋白90β抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
pig IgM (親和純化) 豬IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 1mg
人類白細(xì)胞抗原G/組織相容性白細(xì)胞抗原G抗體 Anti-HLA-G 0.1ml
Rabbit Anti-Biotin 兔抗生物素抗體IgG 0.2ml
F1 protein (YERSINIA PESTIS) 英文名稱： 鼠疫F1蛋白/鼠疫耶爾森氏菌莢膜抗原F1單克隆抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-RGS19(Ser151) 磷酸化G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子19抗體 規(guī)格 0.1ml
pig IgM (親和純化) 豬IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 1mg
sLOX-1(Human Soluble Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1) ELISA Kit 人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-Morphine 嗎啡單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh KCNG4/KV6.3 鉀離子通道蛋白G蛋白4抗體 規(guī)格 0.2ml
PRL ELISA Kit 大鼠催乳素 96T
PPO 英文名稱： 兒茶酚氧化酶PPO抗體 0.2ml
AVSD2 英文名稱： 富含半胱酸與表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白2抗體 0.2ml
Anti-Morphine 嗎啡單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Tris-Glycine SDS Running Buffer Tris-甘酸蛋白電泳緩沖液(粉劑) 1L
TRA1 variant 英文名稱： 排斥抗原gp96 1 變異體抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh OCT1 陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)器1抗體 規(guī)格 0.1ml
streptomycin/OVA 鏈霉素偶聯(lián)雞卵白蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 10mg
C20orf62 英文名稱： 20號(hào)染色體開放閱讀框62抗體 0.2ml
Anti-Phospho-CEBP alpha (Ser21) 磷酸化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP α 抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Anti-FOXF1/FITC 熒光素標(biāo)記叉頭蛋白F1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-CD329/SIGLEC9/FITC 熒光素標(biāo)記唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素9抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh BST2/CD317 骨髓基質(zhì)干細(xì)胞抗原2抗體 規(guī)格 0.2ml
Apelin36 脂肪炎癥因子Apelin36 1mg
HSD11B1 英文名稱： 羥基類固醇脫氫酶11β1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh RIP5/RIPK5 受體結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶5抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-CD329/SIGLEC9/FITC 熒光素標(biāo)記唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素9抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
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