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詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞；C918培養(yǎng)
形態(tài)特性 多角
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 STR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)三株人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞C918、M619和Mum-2B為同一遺傳背景，懷疑存在交叉污染。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS；20mM Hepes
傳代方法 1：
3傳代；2~3天1次。
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR Amelogenin：X；CSF1PO：10，11；D13S317：11；D16S539：8，12；D18S51：15；D19S433：13，14；D21S11：30；D2S1338：24，25；D3S1358：16；D5S818：11，12；D7S820：12；D8S1179：13；FGA：20，21；TH01：8，9.3；TPOX：11；vWA：16，17；
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞；C918培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Rabbit Anti-human Fibrinogen/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記可溶性纖維蛋白原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
CBX5(Chromobox Homolog 5) CBX5(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Park7/DJ-1/CAP1抗體 Anti-CAP1/Park7/DJ-1 0.1ml
SENP5 英文名稱： 泛素相關(guān)修飾蛋白特異性蛋白酶5抗體 0.2ml
E2 tag 英文名稱： E2 tag標(biāo)簽抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-HSL (Ser865) 磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 規(guī)格 0.1ml
CBX5(Chromobox Homolog 5) CBX5(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Trx(Human Thioredoxin) ELISA Kit 人硫氧化還原蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-Phospho-HER2(Tyr1112) 磷酸化HER2受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Microsporidia protien 蜜蜂微孢子蟲蛋白抗體 規(guī)格 1ml
HSL(Human hormone sensitive lipase) ELISA Kit 人激素敏感性脂肪酶 96T
RNF210 英文名稱： 環(huán)指蛋白210抗體 0.2ml
CES2 英文名稱： 羧酸酯酶2抗體 0.1ml
Anti-Phospho-HER2(Tyr1112) 磷酸化HER2受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
大鼠Slit同源物3(Slit3)ELISA試劑盒，英文名：Slit3 ELISA KiISA Kit for Human Growth hormone receptor小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP8)ELISA試劑盒，英文名：MMP8 ELISA KiISA Kit for Human High mobility group protein HMGI-C小鼠法尼酯X受體(FXR)ELISA試劑盒，英文名：FXR ELISA KiISA Kit for Human Interleukin-36 alpha小鼠白介素1受體Ⅱ(IL1R2)ELISA試劑盒，英文名：IL1R2 ELISA KiISA Kit for Human Interleukin-1 receptor type 2小鼠B-細(xì)胞激活因子(BAFF)ELISA試劑盒，英文名：BAFF ELISA KiISA Kit for Human Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1大鼠游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒，英文名：FFA ELISA KiISA Kit for Human Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial大鼠細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3(SOCS-3)ELISA試劑盒，英文名：SOCS-3 ELISA Kit
豚鼠白介素13(IL-13)ELISA試劑盒，英文名：IL-13 ELISA KiISA Kit for Human Melanoma antigen recognized by T-cells 1大鼠缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒，英文名：HIF-1α ELISA KiISA Kit for Human Atrial natriuretic peptide receptor 1大鼠可溶性CD105(sCD105)ELISA試劑盒，英文名：sCD105 ELISA KiISA Kit for Human Oxidized low-density lipoprotein大鼠胱天蛋白酶7(CASP7)ELISA試劑盒，英文名：CASP7 ELISA KiISA Kit for Human Gamma-secretase subunit PEN-2大鼠雌激素受體(ER)ELISA試劑盒，英文名：ER ELISA KiISA Kit for Human Pappalysin-1大鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)ELISA試劑盒，英文名：TIEG1 ELISA KiISA Kit for Human Rho-associated protein kinase 2大鼠組胺H3受體(HRH3)ELISA試劑盒，英文名：HRH3 ELISA Kit
過氧化物酶阻斷劑B 10ml 推薦用于石蠟切片,孵育10分鐘.
VHLH 英文名稱： 腦視網(wǎng)膜血管瘤G7蛋白抗體(逢希伯-林道氏病) 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-CaMK2 alpha (Thr305) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體 規(guī)格 0.1ml
L-HDC (L-Histidine decarboxylase) L-組氨酸脫羧酶抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Dbx2 英文名稱： 大腦發(fā)育同源蛋白2抗體 0.2ml
Anti-Angiotensin II type 1A receptor 血管緊張素Ⅱ1A型受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-CD36L1/SRB1 /FITC 熒光素標(biāo)記高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-PEPT1/FITC 熒光素標(biāo)記腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh B7-DC/CD273/PDL2 程序性死亡配體2抗體 規(guī)格 0.1ml
Acinus peptide ACINUS 多肽抗原 0.5mg
GMRP1 英文名稱： 糖代謝相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-pig IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的兔抗豬IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-PEPT1/FITC 熒光素標(biāo)記腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
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