詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;HH-16培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞系來源于一成年男性的外周血。2010年由中科院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:
2傳代;5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;HH-16培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-ZNF217/FITC 熒光素標(biāo)記鋅指脂蛋白217抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
CYP3A4(Cytochrome p450 3A4) 細(xì)胞色素P450 3A4抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
血管生成素-2抗體 Anti-ANG-2 hu, mo, rat, pig, dog, chi 0.1ml
ZNF185 英文名稱: 鋅指蛋白185抗體 0.2ml
DHFRL1 英文名稱: 二氫葉酸還原酶樣1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Estrogen Receptor alpha (Tyr537) 磷酸化雌激素受體α抗體 規(guī)格 0.1ml
CYP3A4(Cytochrome p450 3A4) 細(xì)胞色素P450 3A4抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
UFC(Human urinary free cortisol) ELISA Kit 人尿游離皮質(zhì)醇Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-PEPT2/SLC15A2 腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Histone H3-like protein 組蛋白H3樣抗體 規(guī)格 0.2ml
MHC II /AgB II /H-1 II ELISA Kit 大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類 96T
PBX1 英文名稱: B淋巴細(xì)胞白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體 0.2ml
Cytochrome B 英文名稱: 細(xì)胞色素B抗體 0.2ml
Anti-PEPT2/SLC15A2 腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
人沉默調(diào)節(jié)蛋白4(SIRT4)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠尿皮質(zhì)素1(UCN1)ELISA試劑盒,英文名:UCN1 ELISA KiISA Kit for Human Tissue alpha-L-fucosidase小鼠熱休克蛋白β6(HSPβ6)ELISA試劑盒,英文名:HSPβ6 ELISA Kit人胚胎發(fā)育分化因子1(GDF-1)ELISA試劑盒人96T31.2-2000 pg/mL小鼠磷脂酶A2激活蛋白(PLAA)ELISA試劑盒,英文名:PLAA ELISA KiISA Kit for Human Growth/differentiation factor 11小鼠饑餓素(GHRL)ELISA試劑盒,英文名:GHRL ELISA Kit人血紅素結(jié)合蛋白(HPX)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠鈣蛋白酶抑制蛋白(CAST)ELISA試劑盒,英文名:CAST ELISA KiISA Kit for Human Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit epsilon小鼠成纖維細(xì)胞生長因子15(FGF15)ELISA試劑盒,英文名:FGF15 ELISA Kit人淋巴細(xì)胞功能關(guān)聯(lián)抗原1α(LFA1α)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠γ-氨基丁酸(γABA)ELISA試劑盒,英文名:γABA ELISA Kit
人反式激活應(yīng)答RNA結(jié)合蛋白(TARBP2) ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL.大鼠核因子κB抑制因子β(IκBβ)ELISA試劑盒,英文名:IκBβ ELISA KiISA Kit for Human Interleukin-5小鼠DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子3(DDIT3)ELISA試劑盒,英文名:DDIT3 ELISA Kit人細(xì)胞角蛋白18(KRT-18)ELISA試劑盒人96T62.5-4000 pg/mL大鼠轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)ELISA試劑盒,英文名:TTR ELISA KiISA Kit for Human Leucine-rich alpha-2-glycoprotein大鼠胰島素自身抗體(IAA)ELISA試劑盒,英文名:IAA ELISA Kit人MFSD2A ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL大鼠心肌特異性肌鈣蛋白T(cTnT)ELISA試劑盒,英文名:cTnT ELISA KiISA Kit for Human Microtubule-associated protein tau大鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA試劑盒,英文名:MPO-ANCA IgG ELISA Kit人胃動素(MTL)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL大鼠葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)ELISA試劑盒,英文名:GLUT4 ELISA Kit
品名 規(guī)格 備注
ZBTB38 英文名稱: 鋅指蛋白ZBTB38抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-CRK (Ser41) 磷酸化CRK抗體 規(guī)格 0.1ml
GSK-3 Alpha (Glycogen Synthase Kinase-3 alpha) 葡萄糖合成激酶-3α抗原(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Desmocollin 1 英文名稱: 橋粒糖蛋白1抗體 0.1ml
S100A7 S100A7 兔單抗 (FITC) Human
VTG ELISA Kit 鯉魚卵黃蛋白原Multi-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-DCP/FITC 熒光素標(biāo)記異常凝血酶原/脫-γ-羧基凝血酶原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CYP2C19 細(xì)胞色素P450 2C19抗體 規(guī)格 0.2ml
AACT/FITC 熒光素標(biāo)記胰糜蛋白酶 0.5ml
Phospho-Lyn (Tyr507) 英文名稱: 磷酸化膜相關(guān)蛋白酪酸激酶Lyn抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh XDH/Xanthine Oxidase 氧化酶抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-DCP/FITC 熒光素標(biāo)記異常凝血酶原/脫-γ-羧基凝血酶原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml