詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0920培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞系來源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:
2傳代;5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0920培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-YBX-1/FITC 熒光素標(biāo)記高保留轉(zhuǎn)錄因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
cx3cl1(chemokine (C-X3-C motif) ligand 1) 趨化因子(C-X3-C 基元)配體1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
α-甲基酰基輔酶A消旋酶抗體 Anti-AMACR/P504S 0.1ml
ZWILCH 英文名稱: 著絲粒ZWILCH蛋白抗體 0.2ml
DEPDC1 英文名稱: 細(xì)胞周期調(diào)控蛋白SDP35抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-FAK(Ser722) 磷酸化粘著斑激酶抗體 規(guī)格 0.1ml
cx3cl1(chemokine (C-X3-C motif) ligand 1) 趨化因子(C-X3-C 基元)配體1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
uPA ELISA Kit 大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Anthrax/FITC 熒光素標(biāo)記抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FAM91A1 FAM91A1蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
sICAM-1(Human Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1) ELISA Kit 人可溶性細(xì)胞間粘附分子1 96T
RNF59 英文名稱: 環(huán)指蛋白59抗體 0.1ml
ACVR1B 英文名稱: 激活素A受體1B抗體 0.2ml
Anti-Anthrax/FITC 熒光素標(biāo)記抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人膽固醇7α單氧酶(CYP7A1)ELISA試劑盒人96T7.8-500 pg/mL小鼠Wnt-3a蛋白(WNT3A)ELISA試劑盒,英文名:WNT3A ELISA Kit人粘蛋白12(MUC12)ELISA試劑盒人96T0.625-40 ng/mL大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA試劑盒,英文名:i-PTH ELISA Kit人膽汁酸受體(Bile acid receptor)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA試劑盒,英文名:EMAb ELISA Kit人抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠胱硫醚γ裂解酶(CSE)ELISA試劑盒,英文名:CSE ELISA Kit人β葡糖苷酶2(GLU2B)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒,英文名:ER ELISA Kit人蛋白C(Pro-C)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠SHC轉(zhuǎn)化蛋白1(SHC1)ELISA試劑盒,英文名:SHC1 ELISA Kit人胰腺再生蛋白1α(REG1α)ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL大鼠棕櫚?;さ鞍?(MPP6)ELISA試劑盒,英文名:MPP6 ELISA Kit
ELISA Kit for Human Complement decay-accelerating factor小鼠17-酮類固醇(17-KS)ELISA試劑盒,英文名:17-KS ELISA Kit人絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶SIK2(Serine/threonine-protein kinase SIK2)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL.大鼠細(xì)胞周期素D3(CCND3)ELISA試劑盒,英文名:CCND3 ELISA Kit人Slit2 ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠前列腺酸性磷酸酶(ACP3)ELISA試劑盒,英文名:ACP3 ELISA Kit人TNF受體相關(guān)因子6(TNF receptor-associated factor 6)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)ELISA試劑盒,英文名:MMP11 ELISA Kit人骨保護(hù)素(OPG)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠碘甲腺原氨酸脫碘酶Ⅱ(DIO2)ELISA試劑盒,英文名:DIO2 ELISA Kit大鼠β-位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(βACE1)ELISA試劑盒,英文名:βACE1 ELISA Kit豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒,英文名:TIMP-1 ELISA Kit
染色液 100ml 自產(chǎn)
ZNF704 英文名稱: 鋅指蛋白704抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-CstF64(Ser498) 磷酸化細(xì)胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體 規(guī)格 0.1ml
GRB2/ASH peptide 生長因子受體結(jié)合蛋白2抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DCUN1D2 英文名稱: DCN1樣蛋白2抗體 0.2ml
Oct4 Oct4 鼠單抗 (FITC) Human
CDK-4(Human Cyclin-dependent kinase 4) ELISA Kit 人周期素依賴性激酶4Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-NPM (Ser4) 磷酸化核仁磷酸蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh IGSF3 免疫球蛋白超家族成員3抗體 規(guī)格 0.2ml
AAA(Human anti-Actin antibody) ELISA Kit 人抗肌動(dòng)蛋白抗體 96T
phospho-PI3KCA(Tyr317) 英文名稱: 磷酸化磷脂酰肌醇激酶催化亞單位A抗體 0.1ml
CD40L 英文名稱: CD40L抗體 0.1ml
Anti-Phospho-NPM (Ser4) 磷酸化核仁磷酸蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml