詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM9401培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞來源于一女性重癥肌無力患者的外周血。1994年由中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:
2傳代;5-6天一次
傳代情況 P8
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM9401培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
TPA ELISA Kit 大鼠組織多肽抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-ADMR/FITC 熒光素標(biāo)記腎上腺髓質(zhì)素受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FER/TYK3 酪氨酸蛋白激酶3抗體 規(guī)格 0.2ml
M-AChR ELISA Kit 大鼠毒蕈堿型乙酰膽堿受體 96T
CXCL2 英文名稱: 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2( GROβ)抗體 0.1ml
AFP4b 英文名稱: AFP4b蛋白抗體 0.2ml
Anti-ADMR/FITC 熒光素標(biāo)記腎上腺髓質(zhì)素受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
U-TSH(Mouse ultrasensitive thyroid-stimulating hormone) ELISA Kit 小鼠高靈敏度促甲狀腺激素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CIDE-B/FITC 熒光素標(biāo)記促進凋亡基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Dog IgM/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 規(guī)格 0.1ml
Monkey IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記猴IgG 0.3ml
LDHA 英文名稱: 乳酸脫氫酶抗體 0.1ml
孔雀石綠快速檢測卡 50T/盒 水產(chǎn)、飼料等
Anti-CIDE-B/FITC 熒光素標(biāo)記促進凋亡基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人非肌性肌球蛋白重鏈9(MYH9)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL大鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1(UGT1)ELISA試劑盒,英文名:UGT1 ELISA KiISA Kit for Human Toll/interleukin-1 receptor domain-containing adapter protein大鼠環(huán)腺苷二磷酸核糖水解酶(cADPRH)ELISA試劑盒,英文名:cADPRH ELISA KiISA Kit for Human Urocortin大鼠彈性蛋白酶(ELA)ELISA試劑盒,英文名:ELA ELISA Kit大鼠Toll樣受體2(TLR2)ELISA試劑盒,英文名:TLR2 ELISA Kit豚鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒,英文名:IL-5 ELISA KiISA Kit for Human Adenosine deaminase-like protein小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒,英文名:GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61 ELISA KiISA Kit for Human Alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme小鼠腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒,英文名:EPI ELISA Kit
人內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒,英文名:GDNF ELISA KiISA Kit for Human Beclin-1小鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒,英文名:B7-2/sCD86 ELISA KiISA Kit for Human Complement component 1 Q subcomponent-binding protein, mitochondrial小鼠骨保素(OPG)ELISA試劑盒,英文名:OPG ELISA KiISA Kit for Human Extracellular calcium-sensing receptor小鼠白介素28A(IL-28A)ELISA試劑盒,英文名:IL-28A ELISA KiISA Kit for Human Complement factor H小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒,英文名:PⅢNP ELISA KiISA Kit for Human Type I iodothyronine deiodinase小鼠轉(zhuǎn)錄激活因子3(ATF3)ELISA試劑盒,英文名:ATF3 ELISA KiISA Kit for Human Endothelial cell-specific molecule 1小鼠纖維膠凝蛋白1(FCN1)ELISA試劑盒,英文名:FCN1 ELISA Kit
山羊抗人 IgM/HRP 0.1ml 美國Jackson公司分裝
Viperin 英文名稱: 病毒抑制蛋白Viperin抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-ATG7(Ser95) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白7抗體 規(guī)格 0.1ml
NOS-2 peptide 一氧化氮合成酶-2多肽抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Dio3 英文名稱: 甲狀腺素5'脫酶3抗體 0.1ml
Anti-AQP2 水通道蛋白-2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
MIP-3 Alpha/CCL20 ELISA Kit 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3αMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Bad/FITC 熒光素標(biāo)記相關(guān)死亡促進因子Bad抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ETS2 癌基因ETS2抗體 規(guī)格 0.2ml
8-epi-PGF2 Alpha (Rabbit 8-epi-prostaglandin F2alpha) ELISA Kit 兔8-異構(gòu)前列腺素 96T
Phospho-MYPT1 (Thr853) 英文名稱: 磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗體 0.1ml
Annexin V 英文名稱: 膜粘連蛋白5抗體 0.1ml
Anti-Bad/FITC 熒光素標(biāo)記相關(guān)死亡促進因子Bad抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml