詳細(xì)介紹
腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞;AAV-293價(jià)格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞;AAV-293價(jià)格
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 我們推薦使用AAV-293細(xì)胞株繁殖腺病毒相關(guān)重組病毒。 AAV-293源自普遍使用的 HEK293細(xì)胞株,但產(chǎn)生的病毒滴度更高。 HEK293細(xì)胞是剪切過的腺病毒5型DNA轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞。 跟HEK293細(xì)胞一樣,AAV-293細(xì)胞反式表達(dá)腺病毒E1基因,當(dāng)共轉(zhuǎn)染三個(gè)AAV助質(zhì)粒(一個(gè)含ITR的質(zhì)粒,pAAV-RC, 和E1缺失助質(zhì)粒)時(shí),可以產(chǎn)生有感染力的腺病毒-相關(guān)病毒顆粒。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:
2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 P(10+5)
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR Amelogenin:X;CSF1PO:7,11,12;D13S317:12;D16S539:9,13;D18S51:17,18;D19S433:15,18;D21S11:28,30.2;D2S1338:19;D3S1358:15,17;D5S818:8,9;D7S820:11;D8S1179:12,14;FGA:23;TH01:7,9.3;TPOX:11;vWA:16,19
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
LH (Rabbit luteotropic hormone) ELISA Kit 兔子促黃體激素Multi-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-Cyclin C/FITC 熒光素標(biāo)記周期素C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DAPK3/ZIP Kinase 凋亡相關(guān)蛋白激酶3抗體 規(guī)格 0.1ml
Chicken IgM/PE 熒光素PE標(biāo)記雞IgM 0.1ml
CD85c 英文名稱: 白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體8抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ZSWIM2 E3泛素蛋白連接酶ZSWIM2抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Cyclin C/FITC 熒光素標(biāo)記周期素C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
VCAM-1/CD106 (Rabbit Vascuolar cell adhesion molecule 1) ELISA Kit 兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1Multi-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-CYP1A1/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞色素P450 1A1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DAB2IP Dab2相互作用蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Rat IgG/Cy7 熒光素Cy7標(biāo)記大鼠IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照) 0.1ml
Lactoperoxidase 英文名稱: 唾液過氧化物酶LPO抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ZNF474/ZFP106 鋅指蛋白474抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-CYP1A1/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞色素P450 1A1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠25羥基維生素D3(25 HVD3)ELISA試劑盒,英文名:25 HVD3 ELISA Kit大鼠5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)ELISA試劑盒,英文名:5-HIAA ELISA Kit豚鼠白介素4(IL4)ELISA試劑盒,英文名:IL4 ELISA Kit人AP-2復(fù)合物亞基β(AP2B1)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠孕酮(PROG)ELISA試劑盒,英文名:PROG ELISA KiISA Kit for Human A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 9小鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)ELISA試劑盒,英文名:SHBG ELISA Kit人ALK酪氨酸激酶受體ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA試劑盒,英文名:CyPA ELISA KiISA Kit for Human Amphiregulin小鼠內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒,英文名:EG-VEGF ELISA Kit
ELISA Kit for Human Epithelial discoidin domain-containing receptor 1小鼠組織金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP2)ELISA試劑盒,英文名:TIMP2 ELISA Kit膽固醇(Cholesterol)ELISA試劑盒通用96T0.156-10 nmol/mL小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒,英文名:MIP-3α/CCL20 ELISA KiISA Kit for Human Catechol O-methyltransferase小鼠骨橋素(OPN)ELISA試劑盒,英文名:OPN ELISA Kit人CD19分子(CD19)ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL小鼠雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒,英文名:ER ELISA KiISA Kit for Human C-C motif chemokine 25小鼠γ氨基丁酸(GABA)ELISA試劑盒,英文名:GABA ELISA Kit人Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL小鼠Ca-ATP酶(Ca-ATPase)ELISA試劑盒,英文名:Ca-ATPase ELISA KiISA Kit for Human C-X-C motif chemokine 2小鼠白細(xì)胞介素5(IL-5)ELISA試劑盒,英文名:IL-5 ELISA Kit
酸性磷酸酶的阻斷劑 10ml Sigma原料
VMAT2 英文名稱: 腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-CAMK2G (Ter286) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶CAMK2G抗體 規(guī)格 0.1ml
LH(Luteinizing Hormone) 人促黃體生成素(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DSCC1 英文名稱: DSCC1蛋白抗體 0.2ml
Anti-Aggrecan2/ADAMTS-5 軟骨蛋白聚糖抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-HBV/pre S1/S2 protein /FITC 熒光素標(biāo)記抗乙肝病毒pre S1/乙肝病毒pre S2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-PDGF-A/FITC 熒光素標(biāo)記血小板源性生長(zhǎng)因子-A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh BAT3/BAG6 Bcl2相關(guān)抗凋亡基因6抗體 規(guī)格 0.2ml
5-HTR2A 5-羥色胺受體2A抗原 0.5mg
GSK-3 beta (NT) 英文名稱: 糖原合酶激酶-3β抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-rat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-PDGF-A/FITC 熒光素標(biāo)記血小板源性生長(zhǎng)因子-A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml