詳細(xì)介紹
雙位點HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7價格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 雙位點HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7價格
形態(tài)特性 圓形
品牌 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞株由陳松森教授實驗室建立;雙位點Cys151和Cys183突變的c-Kit基因轉(zhuǎn)染293ET細(xì)胞,篩選獲得。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS;IL-3 or rhGM-CSF
傳代方法 1:
3傳代;3~4天1次。
傳代情況 不詳
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
BALP ELISA Kit 大鼠骨堿性磷酸酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-Synapsin I (Ser553) 磷酸化神經(jīng)突觸素1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
F II ELISA Kit 大鼠凝血因子Ⅱ 96T
CCDC136 英文名稱: 鼻咽癌相關(guān)蛋白6抗體 0.2ml
Bub3 英文名稱: 有絲分裂蛋白BUB3抗體 0.1ml
Anti-phospho-Synapsin I (Ser553) 磷酸化神經(jīng)突觸素1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
VD3(Human Vitamin D3) ELISA kit 人維生素D3Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-PLGF 胎盤生長因子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh HES1 轉(zhuǎn)錄因子HES-1抗體 規(guī)格 0.2ml
Fbg ELISA Kit 大鼠血纖蛋白原 96T
PRRSV 英文名稱: 豬藍(lán)耳病病毒抗體 1ml
CDH23 英文名稱: 鈣粘蛋白23抗體 0.1ml
Anti-PLGF 胎盤生長因子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人免疫球蛋白j鏈(Ig-j)ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/ml小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A4(S100A4)ELISA試劑盒,英文名:S100A4 ELISA KiISA Kit for Human Insulin-like growth factor I小鼠Ⅶ型膠原(COL7)ELISA試劑盒,英文名:COL7 ELISA Kit人賴氨酰氧化酶相關(guān)蛋白2(LOXL2)ELISA試劑盒人96T37.5-2400 pg/mL大鼠脂肪酸合成酶(FAS)ELISA試劑盒,英文名:FAS ELISA KiISA Kit for Human Legumain大鼠血小板膜糖蛋白IIb(GPIIb)ELISA試劑盒,英文名:GPIIb ELISA Kit人不典型蛋白C13orf33(Uncharacterized protein C13orf33)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL大鼠五聚素3(PTX3)ELISA試劑盒,英文名:PTX3 ELISA KiISA Kit for Human Mitochondrial peptide methionine sulfoxide reductase大鼠神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒,英文名:NSE ELISA Kit人基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠內(nèi)皮素受體A(ETR-A)ELISA試劑盒,英文名:ETR-A ELISA Kit
ELISA Kit for Human Transcription factor AP-1小鼠Ⅰ型前膠原(PCⅠ)ELISA試劑盒,英文名:PCⅠ ELISA KiISA Kit for Human Neuromedin-S大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒,英文名:TRACP-5b ELISA Kit人肥胖抑制素(OB)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL大鼠環(huán)磷腺苷(cAMP)ELISA試劑盒,英文名:cAMP ELISA KiISA Kit for Human Polycomb group RING finger protein 6大鼠富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)ELISA試劑盒,英文名:LRG1 ELISA Kit人血小板衍生生長因子受體β(PDGFR-β)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠補體因子H(CFH)ELISA試劑盒,英文名:CFH ELISA KiISA Kit for Human Peroxiredoxin-2大鼠β防御素(β-Defensin)ELISA試劑盒,英文名:β-Defensin ELISA Kit人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒,英文名:PⅢCP ELISA Kit
兔抗大鼠IgG純化抗體 1mg/10mg 國產(chǎn)
YAP1 英文名稱: 原癌基因Yes相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-c-Raf(Ser259) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 規(guī)格 0.1ml
URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation) 乙型肝炎病毒X蛋白(HBxAg)抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DPYD 英文名稱: 二氫嘧啶脫氫酶抗體 0.2ml
Anti-Beta-Actin β-肌動蛋白抗體(內(nèi)參抗體)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Anti-CD74(MHC II )/FITC 熒光素標(biāo)記CD74抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Ang I/AT1(Angiotensin I) 血管緊張素I抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
超氧化物歧化酶1抗體 Anti-SOD1 0.2ml
5HT3B receptor 英文名稱: 5-羥色胺受體3B抗體 0.1ml
phospho-ERK1 (Thr202/Tyr204) + ERK2 (Thr183/Tyr185) 英文名稱: 磷酸化原活化蛋白激酶1/2抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-MAPKAPK2 (Thr222) 磷酸化原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體 規(guī)格 0.1ml
Ang I/AT1(Angiotensin I) 血管緊張素I抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg