細胞名稱  人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞；HK-2培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細胞樣

品牌 貼壁生長　

特征特性 該細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞，通過導入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉(zhuǎn)染外生包裝細胞Psi-2，Psi-2細胞產(chǎn)生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317，zui后將PA317產(chǎn)生的病毒顆粒導入正常的腎皮質(zhì)近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418篩選轉(zhuǎn)導克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。

培養(yǎng)條件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  

傳代方法 1：

3傳代,2-3天傳一代  

傳代情況 C5

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測 陰性　

STR

同工酶 同工酶鑒定

染色體

使用權(quán)限 A類
人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞；HK-2培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
MAPK1/ERK3 (Mitogen-activated protein kinase 3; P44MAPK) 原活化蛋白激酶3抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

緩激肽B2受體抗體 Anti-Bdkrb2/B2R 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-EGFR (Tyr1092) 磷酸化表皮生長因子受體抗體 規(guī)格 0.1ml

N2添加劑 (原裝) 5ml Gibco

ANKZF1 英文名稱： 鋅指蛋白744抗體 0.2ml

DVL1 英文名稱： 蓬亂蛋白1抗體 0.1ml

緩激肽B2受體抗體 Anti-Bdkrb2/B2R 0.1ml
visfatin ELISA Kit 大鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-TRBF1/TRF1 端粒體復制結(jié)合因子1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh GIRK3/KCNJ9 G蛋白激活內(nèi)向鉀通道3抗體 規(guī)格 0.1ml

NP-Y(Human neuropeptide Y) ELISA Kit 人神經(jīng)肽Y 96T

NRARP 英文名稱： NOTCH調(diào)節(jié)錨蛋白抗體 0.2ml

ARIP2a 英文名稱： 激活素受體2A抗體 0.2ml

Anti-TRBF1/TRF1 端粒體復制結(jié)合因子1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
人外異蛋白A(Ectodysplasin-A)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL小鼠夏科雷登氏結(jié)晶蛋白(CLC)ELISA試劑盒，英文名：CLC ELISA Kit人線粒體CDP-甘油二酯-甘油-3-磷酸3磷酯酰轉(zhuǎn)移酶(PGP synthase 1)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠肺腫瘤抑制因子1(TSLC1)ELISA試劑盒，英文名：TSLC1 ELISA KiISA Kit for Human Hepcidin prohormone大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA試劑盒，英文名：M2-PK ELISA Kit人蛋白聚糖4(PRG4)ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA試劑盒，英文名：a-Glu ELISA Kit人G蛋白信號調(diào)節(jié)因子19(RGS19)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠白細胞介素18(IL-18)ELISA試劑盒，英文名：IL-18 ELISA Kit人S100-A10蛋白(Protein S100-A10)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠心鈉肽(ANP)ELISA試劑盒，英文名：ANP ELISA Kit人突觸極蛋白(Synaptopodin)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠三磷酸腺苷(ATP)ELISA試劑盒，英文名：ATP ELISA Kit

人纖維蛋白原α鏈(FGA)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL小鼠乳過氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒，英文名：LPO ELISA Kit人轉(zhuǎn)化生長因子β受體2(TGFR-2)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠棘皮動物微管關(guān)聯(lián)蛋白樣蛋白2(EML2)ELISA試劑盒，英文名：EML2 ELISA Kit人血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL大鼠二酰甘油-O-酰基轉(zhuǎn)移酶同源物1(DGAT1)ELISA試劑盒，英文名：DGAT1 ELISA Kit人原基因Wnt-1 ELISA試劑盒人96T12.5-800 pg/mL大鼠白介素17(IL17)ELISA試劑盒，英文名：IL17 ELISA Kit豚鼠孕激素(progestogen)ELISA試劑盒，英文名：progestogen ELISA Kit人激酶A錨定蛋白17A(AKAP-17A)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)ELISA試劑盒，英文名：HBeAg ELISA Kit人腺苷脫氨酶(Adenosine deaminase)ELISA試劑盒人96T3.12-200 U/L小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)ELISA試劑盒，英文名：GR-α ELISA Kit
豚鼠IgG干粉 10mg/50mg 國產(chǎn)

WBSCR14 英文名稱： 糖類應(yīng)答元件結(jié)合蛋白ChREBP抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-CDKN1A/P21 (Thr145) 磷酸化p21蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

IL-15(Interleukin-15) 白細胞介素-15抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Desmoglein 2 英文名稱： 橋粒芯糖蛋白2抗體 0.1ml

Anti-Phospho-Ack1(Tyr857/858) 磷酸化Ack1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Anti-WIP1/FITC 熒光素標記原癌基因WIP1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Collagen V (Anti--Collagen Type V ) Ⅴ型膠原(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

抗ABC膜轉(zhuǎn)運蛋白抗體 Anti-ABCG4 0.1ml

2 Cys Peroxiredoxin 英文名稱： 硫氧還蛋白還原酶抗體 0.1ml

EFTUD2 英文名稱： 延伸因子結(jié)合蛋白EFTUD2抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-FLT3 (Tyr589/591) 磷酸化FMS樣酪氨酸激酶3 規(guī)格 0.1ml

Collagen V (Anti--Collagen Type V ) Ⅴ型膠原(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。