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          上海研生實(shí)業(yè)有限公司>資料下載>人寡樹突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白抗體ELISA 檢測試劑盒技術(shù)參數(shù)

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          人寡樹突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白抗體ELISA 檢測試劑盒技術(shù)參數(shù)

          閱讀:128          發(fā)布時(shí)間:2020-3-13
          提 供 商 上海研生實(shí)業(yè)有限公司 資料大小 15.4KB
          資料圖片 下載次數(shù) 12次
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          人寡樹突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白抗體ELISA 檢測試劑盒說明書
          MOG-Ab試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知MOG-Ab濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將MOG-Ab和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中MOG-Ab的濃度呈比例關(guān)系。

          試劑盒內(nèi)容及其配制

          試劑盒成份(2-8℃保存)

          96孔配置

          48孔配置

          配制

          96/48人份酶標(biāo)板

          1塊板(96T)

          半塊板(48T)

          即用型

          塑料膜板蓋

          1塊

          半塊

          即用型

          標(biāo)準(zhǔn)品:80IU/L

          1瓶(0.6ml)

          1瓶(0.3ml)

          按說明書進(jìn)行稀稀

          空白對照

          1瓶(1.0ml)

          1瓶(0.5ml)

          即用型

          標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液

          1瓶(5ml)

          1瓶(2.5ml)

          即用型

          生物素標(biāo)記的抗MOG-Ab抗體

          1瓶(6ml)

          1瓶(3.0ml)

          即用型

          親和鏈酶素-HRP

          1瓶(10ml)

          1瓶(5.0ml)

          即用型

          洗滌緩沖液

          1瓶(20ml)

          1瓶(10ml)

          按說明書進(jìn)行稀釋

          底物A

          1瓶(6.0ml)

          1瓶(3.0ml)

          即用型

          底物B

          1瓶(6.0ml)

          1瓶(3.0ml)

          即用型

          終止液

          1瓶(6.0ml)

          1瓶(3.0ml)

          即用型

          標(biāo)本稀釋液

          1瓶(12ml)

          1瓶(6.0ml)

          即用型

          自備材料

          蒸餾水。
          加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
          振蕩器及磁力攪拌器等。
          安全性

          避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
          實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
          不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
          操作注意事項(xiàng)

          試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
          實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
          不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
          使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
          使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
          洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
          底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
          加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
          按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
          樣品收集、處理及保存方法

          血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
          血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
          細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
          組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
          保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
          試劑的準(zhǔn)備

          標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
          80 IU/L

          (6號標(biāo)準(zhǔn)品)

          原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。

          40 IU/L

          (5號標(biāo)準(zhǔn)品)

          100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          20 IU/L

          (4號標(biāo)準(zhǔn)品)

          100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          10 IU/L

          (3號標(biāo)準(zhǔn)品)

          100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          5.0 IU/L

          (2號標(biāo)準(zhǔn)品)

          100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          2.5 IU/L

          (1號標(biāo)準(zhǔn)品)

          100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          0 IU/L

          (空白對照)

          原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

          洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

          操作步驟

          使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
          根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
          加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
          甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
          每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
          甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
          每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
          取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
          在450nm波長處測定各孔的OD值。
          建議使用的實(shí)驗(yàn)方案

           

          標(biāo)準(zhǔn)品濃度(IU/L)

           

          A

          80

          80

          樣品

          樣品

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          B

          40

          40

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          局限

          6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

          試劑盒性能

          1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

          2. 特異性:不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

          3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

          結(jié) 果 判 斷 與 分 析

          1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

          2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的MOG-Ab標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的MOG-Ab含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出濃度。

          3、檢測值范圍:0-80IU/L

          4、敏感度: 0.1 IU/L

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