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操作步驟如下：

1 液體石蠟的準備 選用優(yōu)質化學純液體石蠟，將液體石蠟分裝加塞，用牛皮紙包好，采用以下兩種方式進行滅菌：121℃濕熱滅菌30min，置40℃恒溫箱中蒸發(fā)水分，經無菌檢查后備用。160℃干熱滅菌2個小時，冷卻后，經無菌檢查后備用。

2 斜面培養(yǎng)物的制備   參照定期移植法。

3 灌注石蠟  將無菌的液體石蠟在無菌條件*入培養(yǎng)好的新鮮斜面培養(yǎng)物上,液面高出斜面頂部1cm左右，使菌體與空氣隔絕。

4 保藏 4.1　注入液體石蠟的菌種斜面以直立狀態(tài)置低溫（4～6℃）干燥處保藏，保藏時間2～10年。 4.2　保藏期間應定期檢查，如培養(yǎng)基露出液面，應及時補充無菌的液體石蠟。

5 恢復培養(yǎng)   恢復培養(yǎng)時，挑取少量菌體轉接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上，生長繁殖后，再重新轉接一次。

 

 

儀器設備與器具：

1 恒溫培養(yǎng)箱：36±1℃。

2 1000ml三角燒瓶、1ml、10ml移液管。

3 接種針。

4 顯微鏡。

5 超凈工作臺。

6 玻片、酒精燈、洗耳球、試管架。

7 天平：感量0.01g。

8 滅菌釜。

9 培養(yǎng)皿（直徑為90mm）、試管，經121℃、30分鐘滅菌。

10試管夾、酒精燈、秒表、載玻片

基本概念：

(1)菌群：由多種細菌混合組成的相對穩(wěn)定的細菌群體，具有某些共同性狀。如大腸菌群包括大腸桿菌、產氣腸細菌及他們之間的過渡類型。

(2) 菌屬：菌種的上一級分類，通常性狀相近、親緣關系密切的若干菌種組成一個菌屬，如芽孢桿菌屬、葡萄球菌屬、乳桿菌屬等。

(3)是細菌最基本的分類單位，通常指表型特征相似、親緣關系接近的一類細菌群體，與同屬內其他種有著明顯差異；當涉及到細菌保存時，菌種是指細菌的種子（用來長期保存）資源。

(4) 菌型：同一菌種的不同細菌，在某些方面存在較小差異的為同一菌型，通常一個菌種內的細菌可以分為多種不同的菌型。

(5) 菌株：由一個獨立分離的單細胞系培養(yǎng)而成的純遺傳型群體及其一切后代，一種微生物的每一個不同來源的純培養(yǎng)物均可稱為該菌種的一個菌株。

 

培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復蘇后需保藏的斜面應于4℃中保藏。

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