詳細介紹
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
產(chǎn)品僅用于科研儲存條件:
14℃或-20℃
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉基因品系棉花T304-40染料法qPCR試劑盒 |
英文名稱 | QPCR of transgenic cotton strain t304-40 by dye method |
貨號 | YSP96684 |
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
反應五要素:
產(chǎn)品僅用于科研參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
Goat Antirabbit IgG/Cy7 Cy7標記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應 0.1mlBetaAmyloid (3135
Goat Antirabbit IgG/Cy5 Cy5標記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應 0.1mlBetaAmyloid 142 CT β淀粉樣肽 142 (C端多肽
Goat Antirabbit IgG/PECY5 PECY5標記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應 0.1mlbetaAmyloid(116
Goat Antirabbit IgG/PE PE標記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應 0.1mlBetaAmyloid(116
Goat Antirabbit IgG/Cy3 Cy3標記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應 0.1mlBetaAmyloid(128
Goat Antirabbit IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應 0.1mlBetaAmyloid(140
Goat Antirabbit IgG/PECy3 PECy3標記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應 0.1mlBetaarrestin 1/2(betaarrestin 1/2
Goat Antirabbit IgG/APC APC標記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應 0.1mlBetacasein( Betacasein
Dystrophin Associated Glycoprotein 1英文簡稱CLPTM1L鋅指蛋白185 檢測范圍:1253nmol/L24ng/ml
utrophin英文簡稱DEFα1鋅結合醇脫氫酶結構域蛋白2 檢測范圍:1254nmol/L
matrilysin英文簡稱MBL2鋅指蛋白909 檢測范圍:1255nmol/L10ng/ml
Stromelysin2英文簡稱NUSγ基丁A受體相關膜蛋白3 檢測范圍:1256nmol/L8ng/mL
Kallikrein 10英文簡稱RTN4鋅指蛋白288 檢測范圍:1257nmol/L20ng/ml
Kallikrein 11英文簡稱RTN4B鋅指蛋白ZBTB38 檢測范圍:1258nmol/L
Kallikrein 2英文簡稱MFSD2A鋅指蛋白693 檢測范圍:1259nmol/L400pg/ml
Kallikrein 6英文簡稱NDUFB4鋅指蛋白ZBTB12 檢測范圍:1260nmol/L200ng/ml
Kininogen英文簡稱NDUFB8鋅指蛋白924 檢測范圍:1261nmol/L10ng/ml
Kininogen 1英文簡稱pPPARγ鋅指蛋白297 檢測范圍:1262nmol/L200IU/ml
colonystimulating factor英文簡稱pPPARγ AbNFκB激活蛋白205 檢測范圍:1263nmol/L200pg/ml
Hexokinase II英文簡稱DEFα2鋅指蛋白23 檢測范圍:1264nmol/L
methylmalonic acid英文簡稱DEFα3鋅指蛋白146 檢測范圍:1265nmol/L20ng/ml
Thyroid stimulating antibody英文簡稱APCR乳腺癌相關基因2(鋅指蛋白364) 檢測范圍:1266nmol/L100ng/ml
thyroid hormone receptor interactor 6英文簡稱GALNT7細胞周期蛋白1結合蛋白 檢測范圍:1267nmol/L400pg/ml
轉基因品系棉花T304-40染料法qPCR試劑盒DIM-7蛋白抗體 英文縮寫:Cyp2-j3
核糖核酸酶Dicer抗體 英文縮寫:CYP2R1
內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞衍生的神經(jīng)纖毛蛋白抗體 英文縮寫:CYP2S1
含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族2抗體 英文縮寫:CYP2W1
DNA連接酶1抗體 英文縮寫:CYP39A1
DHH蛋白抗體 英文縮寫:CYP3A1
D型多巴色素脫羧酶 英文縮寫:CYP3A4
DNA聚合酶α抗體 英文縮寫:CYP3A4
MREG蛋白抗體 英文縮寫:CYP3A4(Cytochrome p450 3A4)
RAS相關抑細胞生長蛋白1抗體 英文縮寫:CYP450