詳細介紹
產(chǎn)品僅用于科研注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系油菜MS1染料法qPCR試劑盒 |
英文名稱 | Dye qPCR kit for transgenic rapeseed MS1 |
貨號 | YSP96709 |
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
產(chǎn)品僅用于科研不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
1,3-BetaD-GluELISAKit大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶 規(guī)格:100mg
HumanechinococcusantibodyIgGELISAKit人包蟲IgG 規(guī)格:20mg
PT(HumanPertussiuToxin)ELISAKit人百日咳毒素 規(guī)格:18.0g/300ml
CD30ELISAKit大鼠CD30分子 規(guī)格:0.5g
C.albicans(HumanCandidaAlbicans)ELISAKit人白色念珠菌 規(guī)格:1.5g
E-CadELISAKit大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白 規(guī)格:12.1IU/支
HumanCoronavirusesIgGELISAkit人流行性乙型腦炎IgG 規(guī)格:100mg
BTCELISAKit大鼠β細胞素 規(guī)格:33.3g/300ml
HumanCoronavirusesIgGELISAkit人病毒 規(guī)格:100mg
ANG-2ELISAKit大鼠血管生成素2 規(guī)格:1g
ANG-1ELISAKit大鼠血管生成素1 規(guī)格:50mg
LTB(Humanheat-labileenterotoxinBsubunit)ELISAKit人不耐熱腸毒素B亞單位 規(guī)格:50mg
CT(HumanChlamydiatrachomatis)ELISAKit人沙眼衣原體 規(guī)格:100mg
ANGELISAKit大鼠血管生長素 規(guī)格:930mIU/支
HumanschistosomaELISAKit人血吸蟲 規(guī)格:100mg
Eichlerialactone甘羅溴銨(標準品) 分子式:C43H53NO14 純度:96.0%
Taraxasterol acetate磺胺(標準品) 分子式:C24H32O8 性狀:Yellow powder 純度:%
Cycloart-25-ene-3β,24-diol磺胺嘧啶(標準品) 分子式:C30H42O11 純度:%
Cycloartane-3,24,25-triol 24,25-acetonide磺胺嘧啶 分子式:C20H24O11 純度:98.0%
δ-Amyrin acetate炔諾孕酮(標準品) 分子式:C20H24O10 純度:98.0%
Quinovic acid 3-O-glucosideBML-275 HCl,物質(zhì)C鹽酸鹽 分子式:C22H30O8 純度:98.5%
Euscaphic acid甲巰咪唑(標準品) 分子式:C20H24O9 純度:98.0%
Quinovin枸櫞酸氯米芬(標準品) 分子式:C22H28O6 性狀:Cryst. 純度:97.0%
Quinovic acid 3-O-(6-deoxyglucoside)28-O-glucosyl ester甲磺酸雙氫麥角毒堿(標準品) 分子式:C20H24O5 性狀:Cryst. 純度:98.5%
轉(zhuǎn)基因品系油菜MS1染料法qPCR試劑盒DNA損傷結(jié)合蛋白1抗體 英文縮寫:DIRC2
DNA損傷結(jié)合蛋白2抗體 英文縮寫:DIS3
CD299抗體 英文縮寫:DIS3L
C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員A抗體 英文縮寫:DIS3L2
C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族6成員A抗體 英文縮寫:DISC1 (CT)
B淋巴細胞銜接分子DAPP1抗體 英文縮寫:DISC1 (NT)
DNA酶1樣蛋白1抗體 英文縮寫:DISC1(disrupted in schizophrenia1)(CT)
抗菌蛋白DCD抗體 英文縮寫:DISC1(disrupted in schizophrenia1)(NT)
肌動蛋白解聚因子抗體 英文縮寫:Dishevelled 2
甘油二酯?;D(zhuǎn)移酶2抗體 英文縮寫:Dishevelled 2
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。