詳細(xì)介紹
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
產(chǎn)品僅用于科研儲存條件:
14℃或-20℃
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系玉米680染料法qPCR試劑盒 |
英文名稱 | QPCR kit for dye method of transgenic maize 680 |
貨號 | YSP96756 |
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
反應(yīng)五要素:
產(chǎn)品僅用于科研參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
雞法氏囊病毒 規(guī)格:>98%,BR Copper(I) bromide
雞傳染性支氣管炎病毒 規(guī)格:>99%,BR Copper(II) acetate
鴨病毒性肝炎病毒 規(guī)格:>99%,BR Copper(II) bromide
鴨瘟病毒 規(guī)格:>98.5%,BR Copper(II) citrate, hydrate
小鵝瘟病毒 規(guī)格:>96.5%,工業(yè)級 Copper(II) hydroxide
雞減蛋綜合癥病毒 規(guī)格:>97%,工業(yè)級 Copper(II) oxalate hydrate
II型豬圓環(huán)病毒重組Cap蛋白 規(guī)格:>99%,BR Copper(II) sulfate, anhydrous
豬細(xì)小病毒重組VP2蛋白 規(guī)格:>99%,BR Creatinine
豬瘟病毒重組E2蛋白 規(guī)格:>70%,BS Crocein scarlet 7B
豬藍(lán)耳病毒重組N蛋白 規(guī)格:BS Crystal ponceau 6R
豬口蹄疫病毒重組VP1蛋白 規(guī)格:>98%,BR Cyclocytidine
豬口蹄疫重組3ABC蛋白 規(guī)格:>98%,分子生物學(xué)級 Cytidine-5'-triphosphate (CTP), 3sodium
豬偽狂犬病毒重組gD蛋白 規(guī)格:>98%,BR Cytochalasin A
豬偽狂犬病毒重組gE蛋白 規(guī)格:>98%,BR Cytochalasin C
兔瘟病毒重組VP60蛋白 規(guī)格:>98%,BR Cytochalasin D
Epifriedelanol acetate洋川芎內(nèi)酯A 分子式:C20H32O 性狀:Powder 純度:97.0%
14,17-Epidioxy-28-nor-15-taraxerene-2,3-diol氧化槐果堿 分子式:C19H22O4 性狀:Powder 純度:%
2-Epitormentic acidBelinostat 分子式:C49H63NO17 性狀:Powder 純度:97.5%
21-Episerratriol氧化前胡素 分子式:C20H30O3 性狀:Powder 純度:%
Taraxeryl acetate野百合堿 分子式:C19H24O3 性狀:Brown powder 純度:97.0%
β-Amyrone野黃芩苷 分子式:C20H32O3 性狀:Powder 純度:98.0%
Serratriol野黃芩素 分子式:C28H40O12 性狀:Powder 純度:98.0%
Methyl 6-acetoxyangolensate8-O-乙酰山梔苷甲酯 分子式:C20H28O5 性狀:Powder 純度:%
Limonin乙酰紫堇靈 分子式:C20H34O3 性狀:Powder 純度:98.0%
轉(zhuǎn)基因品系玉米680染料法qPCR試劑盒多發(fā)性肌炎/硬皮病自身抗原2抗體 英文縮寫:EphA7
核糖體RNA合成蛋白40抗體 英文縮寫:EphA8
核糖體RNA合成蛋白42抗體 英文縮寫:EphB1
多發(fā)性外生骨疣樣蛋白3抗體 英文縮寫:EphB1+EphB2
轉(zhuǎn)錄因子EYA1抗體 英文縮寫:EphB1+EphB2+EphB3+EphB4
磷酸化埃茲蛋白抗體 英文縮寫:EphB2
嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白抗體 英文縮寫:EphB2 R
E1A樣分化抑制因子3抗體 英文縮寫:EPHB3/Eph receptor B3
骨骼肌烯醇化酶抗體 英文縮寫:EPHB4
真核翻譯起始因子2C1抗體 英文縮寫:EphB6