詳細(xì)介紹
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系玉米BT176染料法qPCR試劑盒 |
英文名稱 | Dye qPCR kit for transgenic maize Bt176 |
貨號 | YSP96752 |
?自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
產(chǎn)品僅用于科研引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
AIF1/IBa1 離子鈣接頭蛋白 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Nizatidine
ICAD/DFF45 Beta Caspase激活的脫氧核糖核酶抑制劑 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Aceglutamide
ICOS/CD278 誘導(dǎo)協(xié)同刺激分子CD278 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Montmorillonit
IDE 胰島素降解酶 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Bergamottin
IDE 胰島素降解酶 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Ropivacaine hydrochloride
IDH2 草酰琥珀脫羧酶 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Guaijaverin
IDH3A 草酰琥珀脫羧酶α 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Emtricitabine
IDI1 異戊焦1 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Emtricitabine
Epidemic hemorrhagic fever virus antibody英文簡稱EHFVAb谷氧還蛋白2 檢測范圍:4375nmol/L
intact Fibroblast Growth Factor 23英文簡稱iFGF23谷氧還蛋白5 檢測范圍:4376nmol/L2000pg/mL
C Fibroblast Growth Factor 23英文簡稱cFGF23谷胱甘肽過氧酶2 檢測范圍:4377nmol/L1000pg/mL
NADdependent deacetylase sirtuin6英文簡稱SIRT6谷胱甘肽過氧酶7 檢測范圍:4378nmol/L180U/L
BMPbinding endothelial regulator protein英文簡稱BMPER谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α1 檢測范圍:4379nmol/L2000pg/ml
cholesterol 27α hydroxylase英文簡稱CYP27A1谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶κ 檢測范圍:4380nmol/L160U/L
CYP8b1英文簡稱CYP8b1谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶θ 檢測范圍:4381nmol/L100U/L
Retinoic Acid Receptor Alpha英文簡稱RARa谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶θ2 檢測范圍:4382nmol/L20ng/mL
antidiuretic hormone;vasopressin;arginine vasopressin英文簡稱ADH;VP;AVP粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子3受體 檢測范圍:4383nmol/L80pg/mL
cyclic adenosine diphosphate ribose英文簡稱cADPR血型糖蛋白A/涎糖蛋白 檢測范圍:4384nmol/L20ng/mL
Phosphorylated hepatocyte growth factor receptor英文簡稱pMET顆粒酶A 檢測范圍:4385nmol/L2000pg/mL
Phosphorylated cjun Nterminal kinases英文簡稱pJNK顆粒酶D/B/E/N/G/F/H 檢測范圍:4386nmol/L16ng/mL
Transcription Termination Factor, RNA polymerase I英文簡稱TTF1腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA2 檢測范圍:4387nmol/L16ng/mL
luteinizing hormone receptor英文簡稱LHR腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA1 檢測范圍:4388nmol/L8ng/mL
Interleukin 17D英文簡稱IL17D二醛酶1 檢測范圍:4389nmol/L50pg/mL
轉(zhuǎn)基因品系玉米BT176染料法qPCR試劑盒磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體 英文縮寫:eNOS
磷酸化4E結(jié)合蛋白1,2,3抗體 英文縮寫:ENOSF1
Epsin2B蛋白抗體 英文縮寫:ENPP1
表皮生長因子抗體 英文縮寫:ENPP1
表皮生長因子樣蛋白8抗體 英文縮寫:ENPP2
E3泛素連接酶抗體 英文縮寫:ENPP3
小鼠抗表皮生長因子抗體 英文縮寫:ENPP3/CD203c(ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase 3)
抗表皮生長因子抗體 英文縮寫:ENPP5
內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪氨酸激酶A2+A3+A4抗體 英文縮寫:ENPP6
磷酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪氨酸激酶A2+A3+A4抗體 英文縮寫:ENPP7