詳細介紹
產(chǎn)品僅用于科研注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉基因品系玉米MON809染料法qPCR試劑盒 |
英文名稱 | Dye qPCR kit for transgenic maize mon809 |
貨號 | YSP96740 |
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
產(chǎn)品僅用于科研不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
HINT1 組三聚體核苷結合蛋白1 現(xiàn)貨供應 0.2ml Uracil
HIRA/DGGR1 組蛋白替換精蛋白DGGR1 現(xiàn)貨供應 0.1ml Uracil
Histone H3 組蛋白H3 現(xiàn)貨供應 0.1ml Propantheline bromide
PhosphoHistone H3 (Ser10) 組蛋白H3 現(xiàn)貨供應 0.1ml Tulobuterol hydrochloride
PhosphoHistone H3 (Ser28) 組蛋白H3 現(xiàn)貨供應 0.1ml N(Isoxazol5yl)sulphanilamide
PhosphoHistone H3 (Thr11) 組蛋白H3 現(xiàn)貨供應 0.1ml Labetalol hydrochloride
PhosphoHistone H3 (Thr3) 組蛋白H3 現(xiàn)貨供應 0.1ml Salicylamide
Histone H3 (tri methyl K36) *基組蛋白H3 現(xiàn)貨供應 0.1ml Feprazone
enterovirus71 antibody英文簡稱EV71Ab原纖維蛋白1 檢測范圍:4060nmol/L160ng/ml
soluble Tolllike receptor 2英文簡稱sTLR2性成纖維細胞生長因子 檢測范圍:4061nmol/L40ng/mL
Immunoglobulin G2a英文簡稱IgG2a補體因子H 檢測范圍:4062nmol/L120μg/mL
Immunoglobulin G1英文簡稱IgG1纖維細胞生長因子結合蛋白 檢測范圍:4063nmol/L320μg/mL
Immunoglobulin G2b英文簡稱IgG2bFas活的絲/蘇激酶 檢測范圍:4064nmol/L160μg/mL
phospho glycogen synthase kinase 3β英文簡稱PGSK3β脆性組三聯(lián)體 檢測范圍:4065nmol/L480pmol/L
Nodlike receptor9英文簡稱NLR纖維母細胞表面蛋白 檢測范圍:4066nmol/L1000pg/mL
cyclic citrullinated peptide antibody英文簡稱CCPAb卵泡抑素 檢測范圍:4067nmol/L120U/mL
thymosin b4英文簡稱thymosin b4叉頭蛋白J1 檢測范圍:4068nmol/L1200pg/mL
thymosin b10英文簡稱thymosin b10腦型脂肪結合蛋白 檢測范圍:4069nmol/L2000pg/mL
prothymosinα英文簡稱PTMα成纖維細胞生長因子10 檢測范圍:4070nmol/L2000ng/mL
rheumatoid factor IgM英文簡稱RF IgM促卵泡刺激素受體 檢測范圍:4071nmol/L24mg/L
rheumatoid factor IgG英文簡稱RF IgG范可尼貧血相關蛋白F 檢測范圍:4072nmol/L2400ng/mL
rheumatoid factor IgA英文簡稱RF IgA凝血因子5 檢測范圍:4073nmol/L480ng/mL
AFB1 albumin英文簡稱AFB1AFas相關1因子 檢測范圍:4074nmol/L400pg/ml
轉基因品系玉米MON809染料法qPCR試劑盒磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體 英文縮寫:EEF1G
電子轉移黃素蛋白α抗體 英文縮寫:EEF2
前列腺素E受體蛋白4抗體 英文縮寫:EEF2k
風疹病毒糖蛋白抗體 英文縮寫:EF-CBP2
EFR3A蛋白抗體 英文縮寫:EFEMP2
ENAH蛋白抗體 英文縮寫:EFHA1
乙基丙二酸腦病蛋白抗體 英文縮寫:EFHC1
轉錄因子E2F-3抗體 英文縮寫:EFHC2
轉錄因子E2F-5抗體 英文縮寫:EFHD1
DNA切除修復蛋白1抗體 英文縮寫:EFR3A
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。