詳細介紹
產(chǎn)品僅用于科研注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系番木瓜55-1/63-1 PCR試劑盒 |
英文名稱 | PCR kit for transgenic papaya 55-1 / 63-1 |
貨號 | YSP96775 |
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
產(chǎn)品僅用于科研不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
跨膜結(jié)構域4亞家族成員2英文名稱:B-cell leukemia/lymphoma 6,Bcl6英文簡稱Bcl6 檢測范圍:6246nmol/L-1600pg/mL
跨膜和泛素樣結(jié)構域蛋白1英文名稱:ATP citrate lyase英文簡稱acly 檢測范圍:8671nmol/L-40mU/mL
跨膜蛋白酶絲氨酸1英文名稱:matrix metalloproteinase 26英文簡稱MMP-26 檢測范圍:5050nmol/L-48ng/mL
跨膜蛋白超家族9-1英文名稱:glycerol 3-phosphate dehydrogenase英文簡稱GPDH 檢測范圍:8481nmol/L-240U/L
跨膜蛋白TMEM176B英文名稱:Muscle-specific actin英文簡稱MSA 檢測范圍:6081nmol/L-240pg/mL
跨膜蛋白TMED4英文名稱:Desmosine英文簡稱DES 檢測范圍:8498nmol/L-16ng/mL
跨膜蛋白Sema3C英文名稱:Streptokinase英文簡稱Lnk 檢測范圍:1354nmol/L-160ng/mL
跨膜蛋白Orai2英文名稱:Urokinase英文簡稱UK 檢測范圍:7130nmol/L-400IU/ML
Eriocitrin 規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 E3泛素蛋白連接酶144B/環(huán)指蛋白144B
Eriodictyol 規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 胰島素樣生長因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白1
Dendrobine 規(guī)格:HPLC≥97%,標準品 胰島素樣生長因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白2
Punicalin 規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 整聯(lián)蛋白重復蛋白3
(−)-HuperzineA 規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 一氧化氮合成酶-2(誘導型)
Cyanidin-3-O-glucosidechloride 規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 KB抑制蛋白激酶α/β
Carthamine;SafflowerYellow 規(guī)格:色價E(1%)=150;紅花黃色素含量>95% 分化相關基因2蛋白/立即早期反應蛋白
L(+)-Rhamnosemonohydrate 規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 白細胞介素4誘導蛋白1
L(+)-Rhamnosemonohydrate 規(guī)格:≥98%,BR 細胞間粘附分子4
轉(zhuǎn)基因品系番木瓜55-1/63-1 PCR試劑盒肌肉果糖二磷酸酶抗體 英文縮寫:factor VIII
纖維蛋白原γ鏈抗體 英文縮寫:factor VIII
纖維蛋白肽B抗體(血纖肽B) 英文縮寫:factor VIII
原癌基因c FGR抗體 英文縮寫:Factor VIII B chain
肢體畸形相關蛋白FHOD1抗體 英文縮寫:Factor VIIIa light chain
磷酸化肢體畸形相關蛋白FHOD1抗體 英文縮寫:Factor X
纖連蛋白2抗體 英文縮寫:Factor X heavy chain
纖連蛋白7抗體 英文縮寫:Factor XI heavy chain
彈性蛋白結(jié)合蛋白Fcn2抗體 英文縮寫:Factor XI light chain
范可尼綜合征相關蛋白FAN1抗體 英文縮寫:Factor XII heavy chain
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。