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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 說明書 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 | 主要用途 | 科研實驗 |
| 英文名稱 | Recombinant G Protein Coupled Receptor Kinase | 物種 | Homo sapiens (Human，人) |
| 來源 | 原核表達 | 應(yīng)用 | Cell culture; Activity Assa |
詳細介紹
樣品要求：
1、待標記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標記物結(jié)合的成分，如有特殊成分，請?zhí)崆皹俗⒄f明。
2、待標記樣品最小標記量為1mg，最好是干粉，如果是液體，濃度應(yīng)大于1mg/ml。
3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉成分。
4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。
5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！
產(chǎn)品名稱：G蛋白偶聯(lián)受體激酶5(GRK5)重組蛋白
英文名稱：Recombinant G Protein Coupled Receptor Kinase 5 (GRK5)
GPRK5; G protein-coupled receptor kinase GRK5
酶與激酶
物種：Homo sapiens (Human，人) 來源：原核表達 宿主E.coli 內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位：：Cytoplasm. Nucleus. Cell membrane; Peripheral membrane protei 預(yù)測分子量：30.1kDa 實際分子量：-(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽：Arg304~Thr532 (Accession # P34947) with 緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） 性狀：凍干粉 純度：> 95% 等電點：6.0 應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg |
相關(guān)產(chǎn)品：
胰輔脂酶(CLPS)卵白蛋白偶聯(lián)物 物種； Sus scrofa; Porcine (Pig，豬) 來源； 蛋白偶聯(lián) 性狀：凍干粉
Toll樣受體4(TLR4)卵白蛋白偶聯(lián)物 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 蛋白偶聯(lián) 性狀：凍干粉
肝素酶(HPSE)卵白蛋白偶聯(lián)物 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 蛋白偶聯(lián) 性狀：凍干粉
特性
重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。
(1)原核細胞表達的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。
(2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。
(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑。
操作步驟：
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；
4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；
2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL～1 mL |
5×106個 | 0.2 mL～0.5 mL |
5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；
6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融
馬秋博病毒PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Machupo Virus(MACV)RTPCR
馬胃葡萄球菌PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Staphylococcus equorumPCR
曼那角病毒PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Menangle virusRTPCR
貓庖疹病毒PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Feline Herpes VirusPCR
大鼠N-乙?；?span>-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸(AcSDKP)ELISA試劑盒 ，英文名： AcSDKP ELISA Kit
Mouse catecholamine (CA) ELISA Kit 小鼠兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒
ELISA 小鼠基質(zhì)金屬抑制劑-2(mouse TIMP-2) 48T/96T 進口分裝
CLIAKitforIFI16/p16ELISAKit大鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16規(guī)格：48T/96T
通用型比色法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitGP-MM大鼠糖原0酸化酶同工酶MM規(guī)格：48T/96T
G蛋白偶聯(lián)受體激酶5(GRK5)重組蛋白轉(zhuǎn)輪蟹通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Ixoides spp.PCR
錐蟲通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Trypanosoma spp.PCR
自然感染雉異刺線蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Heterakis isolonchePCR
自養(yǎng)無枝酸菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Amycolata autotrophicaPCR
蛋白表達及純化：
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。
2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。
3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
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