糖原合酶激酶3α(GSK3a)重組蛋白公司正在銷售的產(chǎn)品：細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1(ERK1)重組蛋白 物種； Rattus norvegicus (Rat，大鼠) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉 DNA指導聚合酶β(POLb)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉 磷酸二酯酶4B(PDE4B)重組蛋白 物種； Rattus norvegicus

樣品要求：

1、待標記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標記物結(jié)合的成分，如有特殊成分，請?zhí)崆皹俗⒄f明。

2、待標記樣品最小標記量為1mg，最好是干粉，如果是液體，濃度應大于1mg/ml。

3、抗體IgG樣品中應不含BSA、疊氮鈉成分。

4、大分子蛋白應提供分子量、等電點、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。

5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！

產(chǎn)品名稱：糖原合酶激酶3α(GSK3a)重組蛋白

 英文名稱：Recombinant Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha (GSK3a)

Serine/threonine-protein kinase GSK3A

信號轉(zhuǎn)導 酶與激酶 代謝通路 內(nèi)分泌學

 

相關(guān)產(chǎn)品：

周期素依賴性激酶5(CDK5)重組蛋白 物種； Rattus norvegicus (Rat，大鼠) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉

脂蛋白脂酶(LPL)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉

蛋白激酶Cε(PKCe)重組蛋白 物種； Rattus norvegicus (Rat，大鼠) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉

特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應用中經(jīng)常遇到的問題。

(1)原核細胞表達的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復溶劑即可,復溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。

(2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應用的凍干保護劑和填充劑。

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融

肺炎嗜衣原體PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Chlamydophila pneumoniae PCR

糞產(chǎn)堿桿菌PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Alcaligenes faecalisPCR

跗線螨屬通用PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Tarsonemus spp.PCR

福賽斯坦納菌PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Tannerella forsythiaPCR

大鼠同種異體移植炎癥因子1(AIF1)ELISA試劑盒 ，英文名： AIF1 ELISA Kit

Mouse myeloperoxidase (MPO) ELISA Kit 小鼠髓過氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒

RatInsulin,INSELISAKit 大鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHO-2(Mousehemeoxygenase2)ELISAKit小鼠血紅素氧合酶2規(guī)格：48T/96T

細胞PIM2活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitS-100B大鼠S100B蛋白規(guī)格：48T/96T

糖原合酶激酶3α(GSK3a)重組蛋白抗亞碲酸鹽大腸桿菌:型PCR檢測試劑盒 英文名稱; Telluriteresistant Escherichia coli O157:H7 PCR

苛養(yǎng)木桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Xylella fastidiosaPCR

柯拉松血吸蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Schistosoma curassoniPCR

柯薩奇病毒型變種PCR檢測試劑盒 英文名稱; Coxsackie Virus(CA24v)A24RTPCR

蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。