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產(chǎn)品名稱:C918(眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞)
規(guī)格:5×106cells
貨號:YS-02X9772
產(chǎn)品分類:細(xì)胞系
儲存條件2℃-8℃,避光儲存
運輸條件冰袋冷藏運輸
注意事項
1、使用產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作,避免污染。
2、本產(chǎn)品含有血清和雙抗,如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗,可以直接使用。
3、為保持本產(chǎn)品的最佳使用效果,不宜將其長時間放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。
4、所有產(chǎn)品請于保質(zhì)期內(nèi)使用,超出保質(zhì)期,必須放棄使用。
5、本產(chǎn)品只供進(jìn)一步科研使用,不可應(yīng)用于臨床等其他方面。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個; 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
細(xì)胞復(fù)蘇步驟:
1:水浴鍋預(yù)熱至37℃?zhèn)溆?/span>
2:準(zhǔn)備15mL離心管,并向其中加入適量培養(yǎng)基待用
3:將細(xì)胞凍存管從-80℃冰箱或液氮中取出,放入PE手套中,迅速投入水浴鍋
4:用力搖晃凍存管,使其在1分鐘內(nèi)融化
5:用紙巾擦拭水漬,轉(zhuǎn)移至生物安全柜。用移液槍吸取細(xì)胞懸液,緩慢滴加到步驟2中準(zhǔn)備好的離心管
6:1200rpm離心3分鐘
7:棄上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,接種至新的無菌培養(yǎng)器皿中
PPLO肉湯 英文名稱:PPLO Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g
支原體肉湯培養(yǎng)基 英文名稱:Mycoplasma Broth Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
支原體肉湯培養(yǎng)基(不含瓊脂和酚紅) 英文名稱:Mycoplasma Broth Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
支原體瓊脂培養(yǎng)基(含) 英文名稱:Mycoplasma Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格:250g
PPLO瓊脂 英文名稱:PPLO Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
支原體半流培養(yǎng)基 英文名稱:Mycoplasma Semi-fluid Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
支原體肉湯培養(yǎng)基 英文名稱:Arginine Mycoplasma Broth Meium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
豬支原體培養(yǎng)基 英文名稱:Pig Mycoplasma Base 產(chǎn)品規(guī)格:250g
支原體瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱:Mycoplasma Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
支原體培養(yǎng)基 英文名稱:Mycoplasma Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
C918(眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞)聚甲銨酯I 規(guī)格: 200mg
環(huán)戊噻嗪 規(guī)格: 50mg
81-25-4膽;Cholic acid 規(guī)格: 200mg
491-50-9槲皮-7-O-BETA-D-吡喃 規(guī)格: HPLC≥98%,10mg/vial
8008-99-9大蒜 規(guī)格: 0.5ml
5945-50-6晶蘭;motropein 規(guī)格: 20mg
65497-07-6商陸皂甲 規(guī)格: 20mg
Oroxin B木蝴蝶B; 木蝴蝶甙B 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支
金色酰胺酯 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg
3254-89-5地芬多 規(guī)格: 100mg
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。