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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 詳見說明書 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 | 主要用途 | 科研 |
| 英文名稱 | Recombinant Activated Protein C (APC) | 物種 | Rattus norvegicus (Rat，大鼠) |
| 來源 | 原核表達 | 應(yīng)用 | Cell culture; Activity Assa |
詳細介紹
蛋白表達及純化：
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。
3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。
產(chǎn)品名稱：激活蛋白C(APC)重組蛋白
英文名稱：Recombinant Activated Protein C (APC)
酶與激酶
血液病學(xué)
物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠) 來源：原核表達 宿主E.coli 內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位：：細胞膜, 線粒體, 細胞質(zhì) 預(yù)測分子量：31.4kDa 實際分子量：36kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標(biāo)簽：Gln213~Arg461 with N-terminal His Tag 緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300） 性狀：凍干粉 純度：> 90% 等電點：7.0 應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg |
相關(guān)產(chǎn)品：
泛素結(jié)合酶E2C結(jié)合蛋白E2F(UBE2F)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉
蘇氨酰tRNA合成酶2(TARS2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉
K-乙酰轉(zhuǎn)移酶2A(KAT2A)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉
樣品要求：
1、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分，如有特殊成分，請?zhí)崆皹?biāo)注說明。
2、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg，最好是干粉，如果是液體，濃度應(yīng)大于1mg/ml。
3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉成分。
4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。
5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。
特性
重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。
(1)原核細胞表達的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。
(2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。
(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑。
操作步驟：
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；
4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；
2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL～1 mL |
5×106個 | 0.2 mL～0.5 mL |
5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；
6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！
同人皰疹病毒型PCR檢測試劑盒 英文名稱; Human Herpesvirus 4 (HHV4，EB) )4 PCR 50T
同豬皰疹病毒型偽狂犬病病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Pseudorabies Virus(PrV，1)PCR 50T
頭狀葡萄球菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Staphylococcus capitisPCR 50T
兔痘病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Rabbit Pox Virus(RPV)PCR 50T
Substance P 小鼠P物質(zhì)Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-FBN1 原纖維蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
CLU(Human clusterin) ELISA Kit 人凝聚素 96T
SLP76 英文名稱： 淋巴細胞胞漿蛋白2抗體 0.1ml
C4orf22 英文名稱： 4號染色體開放閱讀框22抗體 0.2ml
Anti-FBN1 原纖維蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
激活蛋白C(APC)重組蛋白犬冠狀病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Canine Corona Virus(CCoV)RTPCR
犬皰疹病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Canine Herpes Virus PCR
犬血支原體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mycoplasma haemocanisPCR
人鼻病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Human Rhinovirus 9 9 PCR
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