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          皮瓣結(jié)構(gòu)特異性核酸內(nèi)切酶(FEN1)重組蛋白

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          更新時(shí)間:2023-04-03 09:37:36瀏覽次數(shù):286

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          產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 詳見說明書
          應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 科研
          英文名稱 Recombinant Flap Structure Specific Endonucle 物種 Homo sapiens (Human,人)
          來源 原核表達(dá) 應(yīng)用 Cell culture; Activity Assa
          皮瓣結(jié)構(gòu)特異性核酸內(nèi)切酶(FEN1)重組蛋白的相關(guān)產(chǎn)品:N-磺氨基葡糖磺基氫化酶(SGSH)重組蛋白 物種; Mus musculus (Mouse,小鼠) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 DNA指導(dǎo)聚合酶α1(POLa1)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 PTEN誘導(dǎo)假定激酶1(PINK1)重組蛋白 物種; Homo sapiens

          詳細(xì)介紹

          相關(guān)產(chǎn)品:

          腦啡肽酶(CD10)重組蛋白 物種; Rattus norvegicus (Rat,大鼠) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 葡萄糖磷酸變位酶1(PGM1)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 苯丙氨酰tRNA合成酶β(FARSb)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉

          僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性:

          產(chǎn)品名稱

          物種

          性狀

          來源

          皮瓣結(jié)構(gòu)特異性核酸內(nèi)切酶(FEN1)重組蛋白

          Homo sapiens (Human,人)

          凍干粉

          原核表達(dá)

          英文名稱:Recombinant Flap Structure Specific Endonuclease 1 (FEN1)

          MF1; RAD2; Maturation Factor-1; DNase IV

          酶與激酶 遺傳科學(xué)

          物種:Homo sapiens (Human,人)

          來源:原核表達(dá)

          宿主E.coli

          內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

          亞細(xì)胞定位::細(xì)胞核, 線粒體

          預(yù)測(cè)分子量:25.2kDa

          實(shí)際分子量:26kDa(差異分析請(qǐng)參閱說明書)

          片段與標(biāo)簽:Met1~Thr195 with N-terminal His Tag

          緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% TrehaloseProclin300

          性狀:凍干粉

          純度:> 90%

          等電點(diǎn):6.9

          應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

          規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

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          標(biāo)簽選擇:

          親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類:一類是短肽類標(biāo)簽;一類是長(zhǎng)肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。

          不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:

          真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:

          a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHOHEK293

          b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

          c.      無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

          d.      細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

          e.      表達(dá)小試,條件優(yōu)化

          f.       表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAEWB

          g.      大量表達(dá)

          h.      親和純化

          i.        檢測(cè)和鑒定

          原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:

          a.      選擇表達(dá)載體

          b.      密碼子優(yōu)化

          c.      基因合成/亞克隆

          d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

          e.      蛋白表達(dá)小試分析

          f.       如果蛋白可溶,蛋白親和純化

          g.      如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。

          h.      鑒定,包括SDS-PAGEWB鑒定

          GZMH蛋白;表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)

            誘導(dǎo)表達(dá)成功后,表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng),按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒太大的問題。

          操作步驟 :

          根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF zui終濃度為 1mM?;靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。

          1、樣品前處理:

          a)對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

          b)對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管,然后再裂解。

          c)對(duì)于組織樣品: 切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

          2、后處理:

          將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

          綿羊鞭蟲PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Trichuris ovisPCR 50T

          米德爾堡病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Middelburg VirusRTPCR 50T

          梅克爾多元癌細(xì)胞病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Merkel Cell Polyomavirus(MCPyV)PCR 50T

          毛細(xì)線蟲通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Capillaria spp.PCR 50T

          PR(Progestogerone receptor)Human 人孕激素受體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

          Anti-Claudin 4 緊密連接蛋白4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

          Rhesus antibody Rh NOC3L/FAD24 脂肪細(xì)胞分化因子24 規(guī)格 0.2ml

          Human Beta Lactoglobulin, Beta-Lg ELISA Kit 人β乳球蛋白 96T

          TUBA1C 英文名稱: 微管相關(guān)蛋白α6抗體 0.1ml

          C1orf112 英文名稱: 1號(hào)染色體開放閱讀框112抗體 0.2ml

          Anti-Claudin 4 緊密連接蛋白4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

          皮瓣結(jié)構(gòu)特異性核酸內(nèi)切酶(FEN1)重組蛋白豬圓環(huán)病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Porcine Circovirus 3 (PCV3)3PCR

          豬圓環(huán)病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Porcine Circovirus(PCV)PCR

          豬血凝性腦脊髓炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Porcine Hemagglultinating Encephalomyelitis VirusPHEVRTPCR

          豬腺病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Porcine AdenovirusSwine AdenovirusPCR

          注意事項(xiàng):  

          1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間。

          2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過 24 小時(shí)。

          3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。

          4、本產(chǎn)品對(duì)人體有害,操作時(shí)請(qǐng)小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

          5、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作


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