蛋白二硫化物異構(gòu)酶A4(PDIA4)重組蛋白公司正在銷售的產(chǎn)品：尿卟啉原脫羧酶(UROD)重組蛋白 物種； Mus musculus (Mouse，小鼠) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉 二肽基肽酶9(DPP9)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉 苯丙氨酰tRNA合成酶β(FARSb)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Huma

公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！

產(chǎn)品名稱：蛋白二硫化物異構(gòu)酶A4(PDIA4)重組蛋白

 英文名稱：Recombinant Protein Disulfide Isomerase A4 (PDIA4)

PDI-A4; ERP70; ERP72; Protein Disulfide Isomerase-Associated 4; Endoplasmic reticulum resident protein 70

酶與激酶

 

樣品要求：

1、待標記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標記物結(jié)合的成分，如有特殊成分，請?zhí)崆皹俗⒄f明。

2、待標記樣品最小標記量為1mg，最好是干粉，如果是液體，濃度應(yīng)大于1mg/ml。

3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉成分。

4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。

5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。
相關(guān)產(chǎn)品：

賴氨酰氧化酶(LOX)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉

脂肪酸去飽和酶1(FADS1)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉

肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶2(CPT2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉

蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。

(1)原核細胞表達的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。

(2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑。

弗萊克索病毒PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Flexal Virus(FLEV)RTPCR

反芻獸曼氏桿菌PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Mannheimia ruminalisPCR

杜克雷嗜血桿菌PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Haemophilus ducreyiPCR

單胞菌通用PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Pseudomonas spp.PCR

大鼠接觸蛋白4(CN4)ELISA試劑盒 ，英文名： CN4 ELISA Kit

Mouse neuophil elastase (NE) ELISA Kit 小鼠中性粒細胞彈性(NE)ELISA試劑盒

RatplateletmembraneglycoproteinⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢaELISAKit 大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforFishi-iodothyronine,T3ELISAKit魚類狀腺原規(guī)格：48T/96T

細胞基質(zhì)金屬(MMP-1)活性熒光定量檢測試劑盒20次

RatovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISAKit大鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

蛋白二硫化物異構(gòu)酶A4(PDIA4)重組蛋白羌蟲病立克次氏體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Rickettsia tsutsugamushiPCR

槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Dicrocoelium dentriticumPCR

腔闊盤吸蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Eurytrema coelomaticumPCR

茄病鐮刀菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Fusarium solaniPCR

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融