N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1(ASAH1)重組蛋白的相關(guān)產(chǎn)品：含F(xiàn)YVE指磷酸肌醇激酶(PIKFYVE)重組蛋白 物種； Mus musculus (Mouse，小鼠) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉 肝素酶(HPSE)卵白蛋白偶聯(lián)物 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 蛋白偶聯(lián) 性狀：凍干粉 前列腺特異性膜抗原(PMSA)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Hu

相關(guān)產(chǎn)品：

纈氨酰tRNA合成酶2(VARS2)重組蛋白 物種； Mus musculus (Mouse，小鼠) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉 腺苷酸激酶3(AK3)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉 雙特異性磷酸酶6(DUSP6)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉

僅供科研實驗產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant N-Acylsphingosine Amidohydrolase 1 (ASAH1)

AC; ASAH; ; 32; Acid Ceramidase; Acylsphingosine deacylase; Putative 32 kDa heart protein

酶與激酶

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細(xì)胞定位：：溶酶體

預(yù)測分子量：32.7kDa

實際分子量：33kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標(biāo)簽：Thr144~Trp395 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl, pH8.0, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose.

性狀：凍干粉

純度：> 97%

等電點：7.5

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

標(biāo)簽選擇：

親和標(biāo)簽：蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類：一類是短肽類標(biāo)簽；一類是長肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的，大致步驟如下：

真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

c.      無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染

e.      表達(dá)小試，條件優(yōu)化

f.       表達(dá)分析和鑒定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表達(dá)

h.      親和純化

i.        檢測和鑒定

原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

e.      蛋白表達(dá)小試分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶，則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定，包括SDS-PAGE和WB鑒定

GZMH蛋白；表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測

　　誘導(dǎo)表達(dá)成功后，表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測應(yīng)該順當(dāng)，按一般的實驗步驟做沒太大的問題。

操作步驟 ：

根據(jù)使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui終濃度為 1mM?；靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對于組織樣品： 切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

羊邊界病病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Border Disease Virus(BDV)RTPCR 50T

羊闊盤吸蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Eurytrema ovisPCR 50T

癢螨通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Psoroptes spp. PCR 50T

液化沙雷菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Serratia liquefaciensPCR 50T

PAR4 (protease-activated receptor 4) 活化受體4/前列腺細(xì)胞凋亡反應(yīng)蛋白4抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-ATF3 活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-APC6/CDC16(Ser560) 0酸化細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體 規(guī)格 0.1ml

Ras 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝

UBE2E1 英文名稱： 泛素蛋白連接酶E1抗體 0.2ml

DCUN1D4 英文名稱： DCUN1D4蛋白抗體 0.2ml

Anti-ATF3 活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

N-?；拾贝减０匪饷?span>1(ASAH1)重組蛋白嗜吞噬細(xì)胞無漿體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Anaplasma phagocytophilumPCR

嗜人錐蠅PCR檢測試劑盒 英文名稱; Cochliomyia hominivoraxPCR

嗜熱鏈球菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Streptococcus thermophilusPCR

嗜麥芽窄食單胞菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Stenotrophomonas maltophiliaPCR

注意事項：  

1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作