中性鞘磷脂酶(NSMASE)重組蛋白的相關(guān)產(chǎn)品：激活蛋白C(APC)重組蛋白 物種； Rattus norvegicus (Rat，大鼠) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉 核糖核酸酶Ⅲ(RNASEN)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉 外切酶體成分2(EXOSC2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原

相關(guān)產(chǎn)品：

脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2(LpPLA2)重組蛋白 物種； Canis familiaris; Canine (Dog，犬) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉 異檸檬酸脫氫酶2(IDH2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶2(ERK2)活性蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉

僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant Neutral Sphingomyelinase (NSMASE)

SMPD2; N-SMase; ISC1; Neutral Sphingomyelin Phosphodiesterase; Sphingomyelin Phosphodiesterase 2,Neutral Membrane; Lyso-platelet-activating factor-phospholipase C

酶與激酶

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

亞細(xì)胞定位：：細(xì)胞膜

預(yù)測(cè)分子量：57.2kDa

實(shí)際分子量：57kDa(差異分析請(qǐng)參閱說明書)

片段與標(biāo)簽：Lys2~Arg236 with N-terminal His and GST Tag

緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 97%

等電點(diǎn)：6.8

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

標(biāo)簽選擇：

親和標(biāo)簽：蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類：一類是短肽類標(biāo)簽；一類是長(zhǎng)肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的，大致步驟如下：

真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

c.      無(wú)內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

e.      表達(dá)小試，條件優(yōu)化

f.       表達(dá)分析和鑒定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表達(dá)

h.      親和純化

i.        檢測(cè)和鑒定

原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

e.      蛋白表達(dá)小試分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶，則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定，包括SDS-PAGE和WB鑒定

GZMH蛋白；表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)

　　誘導(dǎo)表達(dá)成功后，表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng)，按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒太大的問題。

操作步驟 ：

根據(jù)使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui終濃度為 1mM?；靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對(duì)于組織樣品： 切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

安氏毛圓線蟲PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Trichostrongylus axeiPCR 50T

白樂杰馬杜拉放線菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Actinomadura pelletieriPCR 50T

貝爾格萊德病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; DobravaBelgrade Virus PCR 50T

丙型肝炎病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Hepatitis C Virus(HCV)1RTPCR 50T

Oxytoxin 人催產(chǎn)素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Connexin-26 間隙連接蛋白26抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Nidogen 2 巢蛋白NID2抗體 規(guī)格 0.2ml

Human filamentous hemagglutinin,FHA ELISA Kit 人絲狀血球凝集素 96T

TAG1 英文名稱： 瞬時(shí)表達(dá)軸索糖蛋白1抗體 0.1ml

Claudin 19 英文名稱： 緊密連接蛋白19抗體 0.1ml

Anti-Connexin-26 間隙連接蛋白26抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

中性鞘磷脂酶(NSMASE)重組蛋白熱帶念珠菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Candida tropicalisPCR

熱帶利什曼原蟲PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Leishmania tropicaPCR

饒氏無(wú)綠藻PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Prototheca zopfiiPCR

犬血支原體PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Mycoplasma haemocanisPCR

注意事項(xiàng)：  

1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間。

2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆，切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過 24 小時(shí)。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作