菌種的培養(yǎng):
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級(jí)種)、原種(二級(jí)種)和栽培種(三級(jí)種)三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱(chēng)種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無(wú)菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對(duì)于霉菌類(lèi)孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類(lèi)的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
公司專(zhuān)業(yè)代理ATCC菌種,*,質(zhì)量保證,為大中型科研提供嚴(yán)格質(zhì)量體系控制的ATCC,CMCC,CICC,DSMZ標(biāo)準(zhǔn)菌株。
培養(yǎng)條件:
1、營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂:牛肉膏 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾水 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。
2、需氧類(lèi)型:好氧
3、培養(yǎng)溫度:55℃
保存方法:
傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高,營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。
液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng),適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。
懸液保存法:
① 蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
② 糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
載體保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
常用的冷凍保存法:
① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③ 液氮保存法(-196℃):是適用范圍*的微生物保存法。
注意事項(xiàng):
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時(shí)間:細(xì)菌1-2天,酵母3天,霉菌5-7天,大型真菌7-10天。
2、試管斜面種請(qǐng)盡快轉(zhuǎn)接,不建議長(zhǎng)期存放。
3、初次使用時(shí)請(qǐng)按照本說(shuō)明書(shū)推薦條件進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng),如使用其它類(lèi)型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失,BNCC不負(fù)責(zé)任。
4、使用者應(yīng)保證菌種的安全儲(chǔ)存和操作,帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
B;葫蘆苦素B 英文名稱(chēng):Cucurbitacin B; cucurbitacin B 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β4抗體
多紫杉-d9 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口 Docetaxel-d9 SGC7901(人胃細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
Zosuquidar;LY335979 質(zhì)量規(guī)格:>98% LY-335979 RIN-m5f(大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞)苜蓿中華根瘤
2,4-己二炔-1,6-二(>99.0%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC) 2,4-Hexadiyne-1,6-diol 熒光假單胞 Pseudomonas fluorescens
異綠原A 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 20mg 化FMS樣酪氨激3 COTL1 ELISA Kit 毛狀樣蛋白1(COTL1)ELISA試劑盒
英文名稱(chēng):Wilforlide a 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 尿皮質(zhì)素UCN3抗體
雙草;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 0.1g 纖連蛋白7抗體 KPNα2 ELISA Kit 親核素α2(KPNα2)ELISA試劑盒
白花前胡素;praeruptorin 規(guī)格: 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún) IBRS-2(豬腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
白當(dāng)歸素; 比克白芷; 比克白芷素 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支 癌基因ETS2抗體 RDH5 ELISA Kit 視黃脫5(RDH5)ELISA試劑盒
鹽貝凡洛爾(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定 Bevantolol hydrochloride Hep B1.2(人肝細(xì)胞)Lysozyme Antibody/
鹽 質(zhì)量規(guī)格:≥900μg/mg,USP33,BR Vancomycin HCl 大鼠細(xì)胞英文名稱(chēng):INS-1
,胺 質(zhì)量規(guī)格:含量674-786ug /mg,USP30 Amikacin Sulfate 糖原化M(PYGM)重組蛋白英文名稱(chēng):Recombinant Glycogen Phosphorylase, Muscle (PYGM)
肝表面(HBs)抗體免疫球蛋白 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 2.5IU/支,0.5ml/支 誘捕受體3抗體 TUBβ6 ELISA Kit 微管蛋白β6(TUBβ6)ELISA試劑盒
河生腸桿菌生物Ⅰ型價(jià)格FGFR1OP2 FGFR1基因伴侶蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
RBBP5 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml
API5 凋亡抑制因子5抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr771) 磷酸化小板源性生因子受體-B抗體 規(guī)格: 0.1ml
GCET1 B淋巴細(xì)胞生發(fā)中心相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
RNF111 環(huán)指蛋白111抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-RelB(Ser573) 磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
MBP 髓鞘堿性蛋白(磷脂堿性蛋白)抗體 規(guī)格: 0.1ml
RHCG RH型C糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
ABCD1/CCL22 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白22抗體 0.1ml
TSHR 促甲狀素受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
C1orf144 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框144抗體 規(guī)格: 0.2ml
HEATR7B2 熱休克蛋白受體家族蛋白7B2抗體 規(guī)格: 0.2ml