詳細(xì)介紹
Oct4-Neo小鼠胚胎干細(xì)胞系背景資料:小鼠白血病細(xì)胞L1210體外懸浮培首先由G.Moore等(1966)和P.Himmelfarb等(1967)報(bào)導(dǎo)。此細(xì)胞系廣泛用于化學(xué)因子和天然產(chǎn)物細(xì)胞毒活性的常規(guī)篩選。 接種裸鼠在21天內(nèi)100%(5/5)成瘤。
規(guī)格:5×105cells/瓶
培養(yǎng)條件:37℃,5% CO2,PH值7.2~7.4,無(wú)菌恒溫培養(yǎng)。
細(xì)胞數(shù)量:1× 106個(gè)
細(xì)胞傳代:1:4~1:6傳代;每周換液2~3次
細(xì)胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細(xì)胞檢測(cè):細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
培養(yǎng)條件:DMEM(高糖) +10% FBS;37℃,5% CO2
傳代方法:建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件:90%FBS+10%DMSO
細(xì)胞凍存:液氮凍存?????
T25瓶細(xì)胞處理方法
收到Oct4-Neo小鼠胚胎干細(xì)胞系后,檢查外包裝是否完整,細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問(wèn)題,請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作:
1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3. 預(yù)熱*培養(yǎng)基(含1%雙抗)。
4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(40×,100×,200×各一張)。
5. ①若細(xì)胞密度較小,無(wú)菌操作,去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上,進(jìn)行傳代。
②若細(xì)胞密度較大,達(dá)到80%以上,將細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
注:
培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%,建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基。由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái),顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,這時(shí)請(qǐng)?jiān)谂恼蘸髮腋〉募?xì)胞即時(shí)離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基。(這里是針對(duì)原來(lái)*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況,如果原來(lái)FBS濃度是20%,可以增加到25%FBS濃度) 收到細(xì)胞后如細(xì)胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問(wèn)題,請(qǐng)當(dāng)天反饋并提供圖片,且保存前三天照片以便分析。7天內(nèi)反饋,細(xì)胞本身問(wèn)題免費(fèi)重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實(shí)際情況酌情處理;7天內(nèi)未接到任何反饋視為合格,不予免費(fèi)售后。