凝膠法內(nèi)毒素半定量試劑盒用于體外細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測，禁止以任何途徑進(jìn)入機(jī)體。
 本試劑盒又稱鱟試劑，為鱟科動物東方鱟的血液變形細(xì)胞溶解物的冷凍干燥品。 鱟試劑中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下（溫度，pH 值及無干擾物質(zhì)），細(xì)菌內(nèi)毒素激活 C 因子，引起一系列酶促反應(yīng)，使鱟試劑產(chǎn)生凝集反應(yīng)形成凝膠。
規(guī)格及成分 成 份 10 支包裝（小扁盒）
本產(chǎn)品，靈敏度 0.06 EU/mL 0.1 mL×10
凝膠法內(nèi)毒素半定量試劑盒使用手冊 1 份
運輸及保存 常溫運輸，陰涼處避光保存，有效期兩年。
自備試劑 細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品、無內(nèi)毒素水。
使用方法 一、樣品溶液的制備
樣品的 pH 值應(yīng)在 6.0–8.0 之間，若超出此范圍，需用無熱原緩沖液或 0.1N 氫氧
化鈉、0.1N 鹽酸調(diào)節(jié)。若樣品中可能存在鱟實驗的干擾物質(zhì)，見本說明書 4.2“樣品的
干擾實驗”。若樣品中可能含有導(dǎo)致鱟試劑中 G 因子旁路反應(yīng)的（1,3）β－D－葡聚糖，
需選用不會對（1,3）β－D－葡聚糖起反應(yīng)的特異性鱟試劑。
二：細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液及對照液的準(zhǔn)備
2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液 （本試劑盒不提供）
取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品 1 支，按《細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品使用說明書》配制 2λ , 1λ ,
0.5λ,及 0.25λ的一系列內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液 (λ為鱟試劑靈敏度標(biāo)示值)。備用。
注：鱟試劑靈敏度復(fù)核實驗見本手冊其他常用實驗方案。
2.2 陰性對照液：即無內(nèi)毒素水。
2.3 陽性對照液：即濃度為 2λ的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2.4 樣品陽性對照液：即添加濃度為 2λ內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)的樣品溶液。
三：內(nèi)毒素檢測
3.1 鱟試劑的溶解：按標(biāo)示量（本試劑盒為 0.1mL/支）加無內(nèi)毒素水于鱟試劑中，輕輕
振搖使鱟試劑*溶解。注意不要引起氣泡，溶解后的試劑應(yīng)在 10 min 內(nèi)使用（即配即
用）。
3.2 樣品溶液的制備
樣品zui大有效稀釋倍數(shù)（MVD）的計算：
 MVD＝ C·L/λ
λ：測試用鱟試劑靈敏度標(biāo)示值(EU/mL)；L：樣品細(xì)菌內(nèi)毒素限值；C：樣品濃度或樣
品復(fù)溶后所得樣品濃度。當(dāng) L 單位為 EU/mL（溶液）時，C 的單位為 1mL/mL；當(dāng) L
單位為 EU/mg 或者 EU/U 時，C 的單位為 mg/mL 或者 U/mL。
按照計算所得體積，加無內(nèi)毒素水制備樣品溶液。
3.3 各反應(yīng)管中分別加入 0.1mL 陰性對照液，陽性對照液，樣品，或樣品陽性對照液。
封閉管口，輕輕搖勻，垂直放入 37℃的恒溫器中溫育 60 分鐘±2 分鐘，溫育期間避免振
動。
3.4 結(jié)果判斷
3.4.1 將試管從恒溫器中輕輕取出，緩慢倒轉(zhuǎn) 180°。若管內(nèi)的內(nèi)容物呈堅實凝膠，不
變形，不從管壁滑脫為陽性，記錄為（+）；不呈凝膠或雖生成凝膠但不能保持完整并從管
壁滑脫為陰性，記錄為（－）。
3.4.2 只有當(dāng)陰性對照管結(jié)果均為陰性，陽性對照管、樣品陽性對照管結(jié)果均為陽性，實
驗方有效，否則無效。若陰性對照管為陽性，提示鱟試劑、無內(nèi)毒素水或?qū)嶒炂骶呖赡苁?br />到污染。若陽性對照管為陰性，提示鱟試劑活性減失、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液效價降低，鱟試劑
的靈敏度或內(nèi)毒素的效價標(biāo)示不準(zhǔn)確，或內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋不正確。若樣品陽性對照
管為陰性，提示反應(yīng)體系內(nèi)有干擾因素存在。
四 其他常用實驗方案
4. 1 鱟試劑靈敏度復(fù)核實驗
當(dāng)使用新批號的鱟試劑或?qū)嶒灄l件發(fā)生了任何可能影響檢驗結(jié)果的改變時，應(yīng)按《中華人
民共和國藥典》2010 版中《細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法》的“鱟試劑靈敏度復(fù)核實驗”進(jìn)行實驗。
按照下式復(fù)核靈敏度：λ＝lg-1
(∑X/4)，當(dāng) 0. 5λ≤λ ≤2.0λ 時，鱟試劑靈敏度復(fù)核合格，
檢測時仍以標(biāo)示靈敏度 λ 為準(zhǔn)。
4.2 樣品的干擾實驗
當(dāng)鱟試劑、樣品的來源、配方、生產(chǎn)工藝或?qū)嶒灜h(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響實驗結(jié)果的
變化時，須按《中華人民共和國藥典》2010 版中《細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法》的“干擾實驗”
進(jìn)行干擾實驗。
以樣品代替無內(nèi)毒素水為溶劑，配制 2λ, λ, 0.5λ, 及 0.25λ 的內(nèi)毒素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)
行靈敏度復(fù)核。若靈敏度復(fù)核值在 0.5λ 到 2λ之間(包含 0.5 λ及 2 λ)， 則認(rèn)為在此
實驗條件下樣品無干擾。若靈敏度復(fù)核值在 0.5λ 到 2λ之外，則認(rèn)為在此實驗條件下
樣品有干擾，需對樣品進(jìn)行稀釋(稀釋倍數(shù)不得超過zui大有效稀釋倍數(shù) MVD)或進(jìn)行其它
處理消除干擾。
4.3 凝膠限度實驗
凝膠限度實驗用于判斷樣品的內(nèi)毒素含量是否超過藥典所規(guī)定的細(xì)菌內(nèi)毒素限值。按《中
華人民共和國藥典》2010 版中《細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法》的“凝膠限度實驗”進(jìn)行實驗。
在實驗有效的情況下，如果樣品管的兩個平行管均為陰性，判定樣品的內(nèi)毒素含量小于藥
典規(guī)定限值。如果樣品管的兩個平行管均為陽性，判定樣品的內(nèi)毒素含量不符合藥典規(guī)定。
如果樣品管的兩個平行管一管為陽性，另一管為陰性，需進(jìn)行復(fù)試。復(fù)試時，樣品需做 4
個平行管，若所有平行管均為陰性，判定樣品符合規(guī)定，否則判定樣品不符合規(guī)定。
4.4 凝膠半定量實驗
本方法系通過確定反應(yīng)終點濃度來量化樣品中內(nèi)毒素含量。詳見《中華人民共和國藥典》
2010 版中《細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法》的“凝膠半定量實驗”。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 終點顯色法內(nèi)毒素定量試劑盒