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NALM-6 人B淋巴白血病細(xì)胞/STR鑒定介紹

該細(xì)胞由19歲患有急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）的19歲男子的外周血建立，在1976年復(fù)發(fā)。

細(xì)胞特性

1）來(lái)源：外周血

2） 形態(tài)：懸浮生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。

（3）具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

細(xì)胞接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

2） 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基。

4） 如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。

5）  接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

NALM-6 人B淋巴白血病細(xì)胞/STR鑒定           

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI Medium 1640 培養(yǎng)基；北美胎牛血清，10%；雙抗，1%；

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

5.懸浮細(xì)胞的傳代

在傳代密度1 x 106 cells/ml，細(xì)胞可在維持在1.0-2.0 x 106 cells/ml的密度生長(zhǎng)，傳代比例為1:2至1:3,三天一次，低的傳代密度為0.5 x 106cells/ml。(seed out at ca. 1 x 106 cells/ml; maintain at 1.0-2.0 x 106 cells/ml; split ratio of 1:2 to 1:3 every 3 days; minimum density of 0.5 x 106cells/ml)

細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為例；

1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)請(qǐng)注意
(1)傳代時(shí)細(xì)胞的接種密度應(yīng)控制在 1萬(wàn)-4萬(wàn) 活細(xì)胞/平方厘米。
(2)選用高質(zhì)量的胎牛血清配制培養(yǎng)液。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

        一、原代細(xì)胞服務(wù)：
               各類(lèi)模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源
               原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

        二、細(xì)胞系服務(wù)：
               細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū)
               細(xì)胞系培養(yǎng)過(guò)程的技術(shù)指導(dǎo)
               細(xì)胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長(zhǎng)因子、試劑等

        三、iPS細(xì)胞服務(wù)：
               iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無(wú)滋養(yǎng)層）
               iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)
               新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估

        四、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶(hù)定制服務(wù)等

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