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利用高效液相色譜檢測(cè)抗菌素—蟲(chóng)草素的相關(guān)案例
蟲(chóng)草素又被稱為蟲(chóng)草菌素、蛹蟲(chóng)草菌素，是第一個(gè)從真菌中分離出的核苷類抗菌素。20世紀(jì)50年代，野生蛹蟲(chóng)草在吉林長(zhǎng)白山一帶被發(fā)現(xiàn)，研究證實(shí)其成分功效遠(yuǎn)超野生冬蟲(chóng)夏草，故而命名北冬蟲(chóng)夏草；1951年，德國(guó)科學(xué)家等發(fā)現(xiàn)蛹蟲(chóng)草核心成分“蟲(chóng)草素"，發(fā)現(xiàn)其具有多種藥理活性，至今蟲(chóng)草素在新藥研制、保健等多領(lǐng)域備受關(guān)注。
蟲(chóng)草素的檢測(cè)方法以高效液相色譜為主，包括正相、反相、質(zhì)譜聯(lián)用等，還有毛細(xì)管電泳法等。微源檢測(cè)經(jīng)查閱文獻(xiàn)分享一種利用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定冬蟲(chóng)夏草中蟲(chóng)草素含量的檢測(cè)方法。
方法選擇合適色譜柱，流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為乙腈，梯度洗脫0～3min，檢測(cè)波長(zhǎng)260nm，柱溫35℃，進(jìn)樣量10μL。以保留時(shí)間定性，峰面積定量，計(jì)算蟲(chóng)草素含量。精密量取蟲(chóng)草素對(duì)照品4.76mg，置入10mL量瓶，加水適量，使溶解，用水稀釋至刻度，制成濃度為0.476mg／mL的對(duì)照品貯備液，取貯備液1.0mL，置入10mL量瓶，加水定容至10mL，得濃度47.6μg／mL的蟲(chóng)草素對(duì)照品溶液。
準(zhǔn)確稱取冬蟲(chóng)夏草1g，用1％乙酸溶液浸泡過(guò)夜，37℃超聲提取30min，過(guò)濾，收集濾液并用1％乙酸溶液定容至10mL。取2mL，加入乙腈2mL，沉淀蛋白，離心，取上清凍干，加水1mL溶解，0.45lam微孔濾膜濾過(guò)得到供試品溶液，待測(cè)。
供試品溶液進(jìn)樣測(cè)定，得到色譜峰。對(duì)線性關(guān)系精密度、重復(fù)性穩(wěn)定性依次進(jìn)行檢測(cè)。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)(x)，峰面積為縱坐標(biāo)(y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程和相關(guān)系數(shù)得到在范圍內(nèi)的濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，計(jì)算蟲(chóng)草素的峰面積RSD表明實(shí)驗(yàn)的精密度良好穩(wěn)定性質(zhì)良好。
準(zhǔn)確稱取已知蟲(chóng)草素含量的冬蟲(chóng)夏草樣品6份，分別精密加入47.6μg／mL的蟲(chóng)草素對(duì)照品溶液0.5mL，將供試品溶液，按調(diào)試好的色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。取冬蟲(chóng)夏草藥材，將供試品溶液，按調(diào)試好的色譜條件測(cè)定。得到不同產(chǎn)地冬蟲(chóng)夏草蟲(chóng)草素的含量。
利用蟲(chóng)草素的理化性質(zhì)，方法選用乙腈-水作為流動(dòng)相系統(tǒng)，梯度洗脫分離蟲(chóng)草素，可以將蟲(chóng)草素與雜質(zhì)進(jìn)行很好的分離，色譜峰的對(duì)稱度和分離度較好，峰形窄且對(duì)稱。高效液相色譜技術(shù)不斷發(fā)展成熟，相關(guān)的檢測(cè)研究日漸增多。實(shí)驗(yàn)室遵照ISO17025和GMP進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室管理，專注為藥品生產(chǎn)過(guò)程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)提供評(píng)估報(bào)告、方法開(kāi)發(fā)、驗(yàn)證及樣品檢測(cè)等一系列完整的解決方案。更多檢測(cè)問(wèn)題歡迎私信及評(píng)論區(qū)留言！
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