9、基線漂移的主要因素:①柱溫波動。②流動相不均勻。③流通池被污染或有氣體。④檢測器出口阻塞。⑤流動相配比不當(dāng)或流速變化。⑥流動相污染、變質(zhì)。⑦使用循環(huán)溶劑。
10、 檢測器靈敏度不夠的主要因素:①樣品進(jìn)樣量不足。②波長設(shè)置不正確。③檢測器池窗污染。④檢測池中有氣泡。⑤電壓不穩(wěn)。⑥流動相流速不合適。
11、色譜柱的使用和維護(hù)注意事項(xiàng):①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。②應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然。③一般說來色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。④選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。⑤避免將復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。⑥經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。⑦保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置至次日或更長時間。⑧色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是濾片被堵塞,這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。⑨以硅膠為基質(zhì)的填料,只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。每次分析檢測完成后,用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。
12、樣品用直徑為2.5cm,孔徑為0.45um的濾膜針式過濾。如有明確要求需用離心過濾的,經(jīng)離心過濾后取上清液即可。