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AChR binding抗體和blocking抗體
閱讀：1598 發(fā)布時(shí)間：2021-8-18文章要點(diǎn)
文章將MG分為眼肌型和全身型，發(fā)現(xiàn)：
1. AChR binding 和blocking抗體雙陽(yáng)，基本出現(xiàn)于全身型MG，且抗體雙陽(yáng)的患者預(yù)后更差，胸腺瘤風(fēng)險(xiǎn)增大
2. blocking單陽(yáng)均出現(xiàn)于眼肌型MG
3. 研究揭示了抗體滴度和臨床嚴(yán)重程度之間的顯著相關(guān)性。相較于眼肌型MG，全身型MG的AChR-binding和blocking抗體平均滴度都更高。但也存在抗體低滴度的全身型的病例。作者認(rèn)為這反映了AChR抗體的特異性、親和性和同型的異質(zhì)性
4. 亞洲人眼肌型MG多發(fā)，可能與抗體類(lèi)型有關(guān)
5. 兩種抗體的檢測(cè)有助于MG的診斷和預(yù)后
摘要
重癥肌無(wú)力(MG)是一種自身免疫性疾病，與直接作用于神經(jīng)肌肉連接處的突觸后肌肉成分的抗體有關(guān)。乙酰膽堿受體(AChR)抗體反應(yīng)的異質(zhì)性使得AChR抗體被分為3種類(lèi)型：binding(結(jié)合)、blocking(阻斷) 和modulating(調(diào)節(jié))抗體。本研究的目的是比較AChR抗體的類(lèi)型與MG患者的臨床嚴(yán)重程度。
本研究納入的患者均進(jìn)行了binding抗體和blocking抗體檢測(cè)，且自診斷以來(lái)疾病持續(xù)時(shí)間超過(guò)2年。根據(jù)美國(guó)重癥肌無(wú)力基金會(huì)的臨床分類(lèi)，將患者分為5個(gè)主要類(lèi)型。同樣，入組患者被分為眼肌型和全身型。我們比較了眼肌型和全身型的抗體類(lèi)型和滴度以及胸腺狀態(tài)。35例患者符合納入標(biāo)準(zhǔn)。其中16例患者(47%)同時(shí)具有binding和blocking AChR抗體，11例患者(31%)僅具有binding抗體，8例患者(22%)僅具有blocking抗體。根據(jù)明確的臨床分型，眼肌型和全身型分別為10例和25例。全身型中16例患者同時(shí)具有兩種AChR抗體，其余患者僅顯示binding抗體。所有只檢出blocking抗體的患者均被分為眼肌型。因此，binding和blocking抗體檢測(cè)可能更有助于預(yù)測(cè)MG患者的預(yù)后和診斷。
介紹
重癥肌無(wú)力(MG)是一種自身免疫性疾病，與直接作用于神經(jīng)肌肉連接處的突觸后肌肉成分的抗體有關(guān)。在大多數(shù)情況下，它是由抗煙堿性乙酰膽堿受體(AChR)的致病性自身抗體引起的[1,2]，但其他終板蛋白，如肌肉特異性受體酪氨酸激酶(MuSK)[3]或脂蛋白相關(guān)蛋白4 (LRP4)[4,5]，也可能作為自身免疫性MG的靶點(diǎn)。表現(xiàn)出AChR抗體的個(gè)體通常不表達(dá)單一的單克隆抗體群體。由于AChR抗體反應(yīng)的異質(zhì)性，AChR抗體被分為三種類(lèi)型：binding(結(jié)合)、blocking(阻斷) 和modulating(調(diào)節(jié))抗體。binding抗體可激活補(bǔ)體，導(dǎo)致AChR缺失，與疾病的臨床嚴(yán)重程度密切相關(guān)。blocking抗體可能損害乙酰膽堿與受體的結(jié)合，導(dǎo)致肌肉收縮不良。調(diào)節(jié)抗體引起受體內(nèi)吞作用，導(dǎo)致AChR表達(dá)缺失[6,7]。在50%的MG患者中檢測(cè)到blocking抗體，但與binding抗體滴度相比，blocking抗體滴度與嚴(yán)重程度的相關(guān)性較差[8,9]。常見(jiàn)的方法是檢測(cè)血清AChR binding抗體，該抗體在85%的MG患者中出現(xiàn)升高。滴度在MG患者中變化很大，與臨床疾病嚴(yán)重程度相關(guān)性較弱，但在個(gè)別患者中滴度與臨床評(píng)分相關(guān)性較好[10]。本研究的目的是比較AChR binding抗體和blocking抗體對(duì)MG的診斷能力，并評(píng)估MG患者的臨床嚴(yán)重程度。
方法
受試者
對(duì)濟(jì)州國(guó)立大學(xué)醫(yī)院2006年1月至2012年12月期間MG注冊(cè)的患者記錄進(jìn)行了審查。我們分析了44例證實(shí)為MG的患者的抗體類(lèi)型和病歷。納入研究的患者均接受了binding和blocking AChR抗體檢測(cè)，且自診斷以來(lái)病程超過(guò)2年。只做過(guò)binding或blocking其中一種抗體試驗(yàn)的患者，以及被診斷為血清MG陰性的患者被排除在外。根據(jù)美國(guó)重癥肌無(wú)力基金會(huì)(MGFA)的臨床分類(lèi)，將患者分為5個(gè)主要類(lèi)型。在開(kāi)始研究時(shí)，我們通過(guò)MGFA分類(lèi)重新評(píng)估臨床階段。再次根據(jù)MGFA分類(lèi)將入組患者分為眼肌型和全身型。我們比較了眼肌型和全身型的抗體類(lèi)型和滴度以及胸腺狀態(tài)。研究方案由機(jī)構(gòu)審查委員會(huì)審查和批準(zhǔn)。
乙酰膽堿受體自身抗體檢測(cè)
AChR-binding抗體通過(guò)免疫沉淀法測(cè)定，該方法使用可溶性AChR與125 I-α-環(huán)蛇毒素相復(fù)合。乙酰膽堿受體從人體肢體肌肉中溶解于非離子型洗滌劑中，并與125 I-α-環(huán)蛇毒素復(fù)合來(lái)提供抗原。與患者血清孵育后，加入過(guò)量的山羊抗人免疫球蛋白G和M?？贵w結(jié)合的乙酰膽堿受體-125I-α-環(huán)蛇毒素復(fù)合物將與人類(lèi)總免疫球蛋白共同沉淀。測(cè)定了洗滌過(guò)的沉淀的放射性。AChR-binding抗體滴度大于或等于0.5 nM被認(rèn)為是陽(yáng)性。
采用放射免疫法檢測(cè)AChR-blocking抗體。樣品與用洗滌液溶解的受體在室溫下孵育1小時(shí)。在孵育期間，樣本中的AChR-blocking抗體得以與受體結(jié)合。經(jīng)過(guò)孵育，125I-α-環(huán)蛇毒素得以與受體上的剩余結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合。受體隨后與Sepharose-Con A沉淀。離心后，沉淀中含有125I-α-環(huán)蛇毒素。125I-α-環(huán)蛇毒素的含量與原始樣本中AChR-blocking抗體的濃度成反比。125I-α-環(huán)蛇毒素結(jié)合的抑制率反映了血清樣本中這些抗體的濃度。AChR-blocking抗體顯示15%或更大的阻斷被認(rèn)為是陽(yáng)性的。
數(shù)據(jù)分析
采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析(版本11.0)。兩組間比較采用卡方檢驗(yàn)和Fisher精確檢驗(yàn)。兩組binding抗體和blocking抗體滴度的比較采用Wilcoxon檢驗(yàn)，p值< 0.05為顯著性。
結(jié)果
35例患者符合納入標(biāo)準(zhǔn)。12名患者(35%)為男性，23名患者(65%)為女性。在35例患者中，16例(47%)同時(shí)具有blocking和binding AChR抗體，11例(31%)僅具有binding抗體，8例(22%)僅具有blocking抗體類(lèi)型。根據(jù)MGFA分類(lèi)，我們將35例患者分為5類(lèi)：10例為種類(lèi)1，12例為種類(lèi)2，7例為種類(lèi)3，2例為種類(lèi)4，4例為種類(lèi)5(表1)。根據(jù)明確的臨床分型，分為眼肌型10例，全身型25例。全身型中16例患者同時(shí)具有兩種AChR抗體，其余患者僅顯示binding抗體。僅有blocking抗體的患者均來(lái)自眼肌型。除了2例患者最初表現(xiàn)為肌無(wú)力危象外，大多數(shù)患者最初僅累及眼肌。所有患者在最初診斷時(shí)均進(jìn)行了胸腺CT檢查。胸腺狀況由放射科醫(yī)生評(píng)估，診斷為胸腺增生或胸腺瘤的全身性MG患者接受胸腺切除手術(shù)。胸腺增生7例，全身性MG患者胸腺增生6例。在35例患者中，6例發(fā)現(xiàn)胸腺瘤，5例同時(shí)具有兩種AChR抗體類(lèi)型。6例胸腺瘤MGFA分型的臨床情況如下：IIb級(jí)1例，IIIb級(jí)2例，IVb級(jí)2例，V級(jí)1例。胸腺瘤的WHO分型為AB型3例，B1型2例，B3型1例。Masaoka分級(jí)系統(tǒng)對(duì)胸腺瘤分期的描述見(jiàn)表1。同時(shí)具有binding抗體和blocking抗體的MG患者的臨床嚴(yán)重程度高于僅具有binding或blocking單一抗體的MG患者。全身型的患者平均抗體滴度較高。全身型患者binding抗體和blocking抗體的平均滴度分別為9.32 nmol/L和36.43%。在眼肌型患者中，binding抗體和blocking抗體的平均滴度分別為2.30 nmol/L和15.53%(表2)。眼肌型和全身型的抗體滴度有顯著性差異(p<0.05)。
表1 重癥肌無(wú)力患者的臨床特點(diǎn)
MGFA臨床分型 | |||||
特征 | I型 | II型 IIa/IIb | III型 IIIa/IIIb | IV型 IVa/IVb | V型 |
患者數(shù)量 | 10 | 12 | 7 | 2 | 4 |
7/5 | 2/5 | 0/2 | |||
年齡(中位數(shù)，年) | 43 | 46 | 47 | 38 | 34 |
性別(女/男) | 6/4 | 8/4 | 5/2 | 1/1 | 3/1 |
AChR抗體 | |||||
僅Binding(n) | 2 | 6/2 | 1/0 | 0 | 0 |
僅Blocking(n) | 8 | 0 | 0 | 0 | 0 |
兩者都有(n) | 0 | 1/3 | 1/5 | 0/2 | 4 |
胸腺評(píng)價(jià) | |||||
正常(n) | 9 | 6/2 | 2/1 | 0 | 2 |
增生(n) | 1 | 1/2 | 0/2 | 0 | 1 |
胸腺瘤(n) | 0 | 0/1 | 0/2 | 0/2 | 1 |
胸腺瘤分級(jí)a | I和IIa | IIa | IIb | ||
AChR 乙酰膽堿受體，MGFA 美國(guó)重癥肌無(wú)力基金會(huì)，n 患者數(shù)量
a Masaoka分級(jí)系統(tǒng)
表2 眼部重癥肌無(wú)力與全身重癥肌無(wú)力的比較
眼肌型 | 全身型 | |
患者數(shù)量 | 10 | 25 |
AChR抗體 | ||
僅Binding(n) | 2 | 9 |
僅Blocking(n) | 8 | 0 |
兩者都有(n) | 0 | 16 |
抗體滴度 | ||
Binding(nmol/L)* | 2.3 (0.02-5.19) | 9.32 (0.45-16.71) |
Blocking(%)* | 15.53 (10.34-27.78) | 36.43 (2.11-68.95) |
胸腺評(píng)價(jià) | ||
正常(n) | 9 | 13 |
增生(n) | 1 | 6 |
胸腺瘤(n) | 0 | 6 |
AChR 乙酰膽堿受體，n 患者數(shù)量，括號(hào)內(nèi)為抗體滴度范圍
*用Wilcoxon檢驗(yàn)比較眼肌型和全身型抗體滴度(p值<0.05)
討論
AChR抗體檢測(cè)是診斷MG的基礎(chǔ)驗(yàn)證試驗(yàn)。一些研究已經(jīng)檢驗(yàn)了AChR抗體存在的診斷準(zhǔn)確性[11-13]。然而，據(jù)我們所知，很少有研究根據(jù)抗體類(lèi)型比較臨床嚴(yán)重程度。本研究中我們證明，同時(shí)具有blocking抗體和binding抗體的MG患者預(yù)后更差，并傾向于發(fā)生胸腺瘤。最常見(jiàn)的方法是檢測(cè)血清AChR-binding抗體[14]。然而，這種方法不能區(qū)分一般的binding抗體和更具體的modulating人群。此外，binding試驗(yàn)不容易檢測(cè)blocking抗體。它們可以通過(guò)直接的空間干涉或變構(gòu)機(jī)制起作用。與blocking抗體相關(guān)的病理將導(dǎo)致受體功能最迅速的喪失。有報(bào)道稱(chēng)疾病嚴(yán)重程度與binding抗體滴度之間存在一定的相關(guān)性，但這種相關(guān)性是可變的，因此binding抗體滴度并不能預(yù)測(cè)個(gè)體患者的預(yù)后[15,16]。
其他檢測(cè)患者血清抑制膽堿能配體(blocking抗體)結(jié)合或誘導(dǎo)AChR(modulating抗體)調(diào)節(jié)能力的方法對(duì)診斷靈敏度的貢獻(xiàn)相對(duì)較小。在binding試驗(yàn)中加入blocking和modulating抗體試驗(yàn)可使陽(yáng)性率提高約10%。據(jù)報(bào)道，blocking抗體通常與binding抗體有關(guān)[8]。在沒(méi)有binding抗體的MG患者中，AChR-blocking抗體檢測(cè)很少呈陽(yáng)性，我們目前發(fā)現(xiàn)它作為MG的診斷試驗(yàn)是有價(jià)值的，因?yàn)?/span>binding抗體和blocking抗體之間的陽(yáng)性率沒(méi)有顯著差異。通過(guò)一種靈敏的方法，我們發(fā)現(xiàn)大多數(shù)MG患者都有blocking抗體。先前關(guān)于這些抗體的報(bào)告顯示由于不同的分析程序而產(chǎn)生不同的結(jié)果。因此，在診斷MG時(shí)，兩種抗體檢測(cè)更有助于診斷和預(yù)測(cè)MG患者的預(yù)后。
抗體的致病作用可能并不局限于一種特殊類(lèi)型的抗體。據(jù)報(bào)道，blocking抗體與MG患者的臨床狀態(tài)并沒(méi)有很好的相關(guān)性[8,17]。然而，在我們的研究中，在眼部和輕度全身性MG患者中發(fā)現(xiàn)的更多的是僅blocking或binding抗體。此外，僅有blocking抗體的患者均來(lái)自眼肌型。相反，同時(shí)具有binding抗體和blocking抗體的患者傾向于進(jìn)展為全身性MG。據(jù)報(bào)道，MG的臨床特征在不同人群之間存在一定的差異，特別是亞洲人和白種人之間。與白種人相比，亞洲人群中，MG似乎較早于兒童期發(fā)病，僅出現(xiàn)眼部癥狀。此外，據(jù)報(bào)道，中國(guó)患者的眼部MG患病率較高[18]。雖然納入的患者不多，但我們的患者出現(xiàn)眼部MG的比例較高。我們推測(cè)亞洲人高比例的眼部MG與抗體類(lèi)型有關(guān)。
有趣的是，我們的研究揭示了抗體滴度和臨床嚴(yán)重程度之間的顯著相關(guān)性。全身性MG患者傾向于有較高的AChR-binding和blocking抗體滴度。然而，一些全身型的患者抗體型滴度較低。這些看似矛盾的結(jié)果反映了AChR抗體的特異性、親和性和同型的異質(zhì)性。橫紋肌抗體提示胸腺瘤和更嚴(yán)重的疾病的存在[19]。最近的報(bào)道表明，抗KCNA4抗體可能是鑒別胸腺瘤和嚴(yán)重表型患者的有用標(biāo)志物，但還需要進(jìn)一步的證實(shí)[20]。雖然我們沒(méi)有檢測(cè)針對(duì)橫紋肌抗原或電壓門(mén)控鉀通道的抗體，但我們的研究揭示了胸腺瘤與兩種AChR抗體之間的相關(guān)性。
盡管回顧性研究存在局限性，我們的研究表明，同時(shí)具有binding抗體和blocking抗體的MG患者表現(xiàn)出更嚴(yán)重的全身性MG或肌無(wú)力危像。全身型的患者往往有較高的binding和blocking抗體滴度。我們建議，這兩種抗體的測(cè)試都有助于確定疾病是否會(huì)普遍化。
參考文獻(xiàn)：略
原文：Kang S Y, Oh J H, Song S K, et al. Both binding and blocking antibodies correlate with disease severity in myasthenia gravis[J]. Neurological Sciences Official Journal of the Italian Neurological Society & of the Italian Society of Clinical Neurophysiology, 2015, 36(7):1167.
譯：RSRTJ
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