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          綿羊CYTB基因核酸檢測(cè)試劑盒

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          • 所在地 上海市

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          更新時(shí)間:2023-03-15 10:29:02瀏覽次數(shù):92

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          產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
          應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)
          綿羊CYTB基因核酸檢測(cè)試劑盒公司正在銷售的產(chǎn)品:小鼠受體(FOLR)PCR檢測(cè)試劑盒 ,英文名: FOLR
          小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseB-cellleukemia/lymphoma2,Bcl-2ELISAKit 50T
          人甲基化DNA[蛋白]半胱S甲基轉(zhuǎn)移酶免疫試劑盒 Human methylated-DNA--protein-cysteine S-me

          詳細(xì)介紹

          操作流程
          收集基因信息——>設(shè)計(jì)引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測(cè)序——>測(cè)序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫(kù)——>質(zhì)粒實(shí)物保存。

          產(chǎn)品名稱

          分類

          規(guī)格

          綿羊CYTB基因核酸檢測(cè)試劑盒

          PCR檢測(cè)試劑盒

          50T

          5.png


          PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
          方法
          1
          :在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
          10×PCR buffer
          5 μl     dNTP mix
          2mM
          4 μl    
          引物110pM
          2 μl    
          引物210pM
          2 μl     Taq
          酶 (2U/μl
          1 μl     DNA
          模板(50ng-1μg/μl
          1 μl      
          ddH2O 50 μl
          PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
          2
          :調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93
          預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,在727min
          3
          :伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4
          待電泳檢測(cè)或-20長(zhǎng)期保存。
          4
          PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
          下列相關(guān)產(chǎn)品:
          小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)PCR檢測(cè)試劑盒 ,英文名: HABP

          小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKIT 50T

          人胱天10(CASP10)免疫試劑盒 Human CASP10

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          6-OH-MTHβC高效液相色譜電化學(xué)定量檢測(cè)試劑盒20

          MouseGamma
          實(shí)時(shí)熒光定量PCR
          實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:
          1
          Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
          2
          Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
          外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性定量方法,已得到,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
          定量PCR方法:
          a、競(jìng)爭(zhēng)法
          選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
          b
          、內(nèi)參照法
          在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
          c
          PCRELISA
          利用di高辛等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCRELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
          下列是公司正在銷售的產(chǎn)品:
          豚鼠白介素22(IL-22)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-22 ELISA Kit

          Human ubiquitin protein (Ub) ELISA Kit 人泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒

          RabbitIerleukin1β,IL-1βELISAKit 兔子白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

          CLIAKitforBeta-EP(RabbitBeta-Endorphin)ELISAKit兔子β內(nèi)啡肽規(guī)格:48T/96T

          細(xì)菌樣品二維電泳裂解液用于細(xì)菌蛋白二維電泳

          RabbitGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISAKit兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

          小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒 ,英文名: ACA-IgA ELISA Kit

          大鼠C(VC)ELISA檢測(cè)試劑盒RatVitaminC,VCELISAKit 96T/48T

          人蛋-R-亞砜還原酶 B2,線粒體(MSRB2/CBS-1/MSRB/CGI-131)免疫試劑盒 Human MSRB2 ELISA kit

          Ratplasminogenactivatorinhibitor1,PAI-1ELISAKit大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

          GST釣餌(PULLDOWN)檢測(cè)試劑盒2/5

          Mousethrombospondin1,TSP-1ELISA試劑盒小鼠血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
          綿羊CYTB基因核酸檢測(cè)試劑盒Anti-PAX2/FITC 熒光素標(biāo)記配對(duì)盒基因2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

          Goat Anti-mouse IgG/FITC 熒光素標(biāo)記羊抗小鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml

          多巴胺受體-D2抗體 Anti-DAD2 0.1ml

          Rabbit anti-MG IgG/Bio 標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 0.1ml

          FOXD3 英文名稱: 叉頭蛋白D3抗體 0.2ml

          Rhesus antibody Rh Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939) 0酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體 規(guī)格 0.1ml

          Goat Anti-mouse IgG/FITC 熒光素標(biāo)記羊抗小鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
          操作流程:
          1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4。
          2.
          設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
          3.
          樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
          4.
          除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37
          水浴鍋或恒溫箱溫育60min
          5.
          棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
          6.
          每孔加入底物AB50μL,37
          避光孵育15min產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)
          7.
          每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。


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