商品介紹:
M11線粒體染色試劑盒是利用M 系列探針進(jìn)行線粒體特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的M11線粒體染色探針為紅色熒光標(biāo)記的線粒體探針,具有579/599nm的大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。本品適合雙標(biāo)實(shí)驗(yàn),因其紅色熒光與其他的綠色熒光探針具有良好的分辨率。 M系列探針是一種細(xì)胞滲透型的對(duì)活細(xì)胞中的線粒體體進(jìn)行選擇性染色的一類新型熒光染料,該系列探針可以選擇性標(biāo)記線粒體,包含標(biāo)記線粒體的弱巰基反應(yīng)性的氯甲基官能團(tuán)。只需簡(jiǎn)單孵育細(xì)胞,即可穿過(guò)細(xì)胞膜并直接聚集在活性線粒體上??捎行?biāo)記活細(xì)胞。一旦線粒體被染色后,還能根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需求進(jìn)行固定(醛類固定劑如)和透化(醛類去污劑如Triton X-100),探針依然維持在細(xì)胞內(nèi)。 雖然傳統(tǒng)的線粒體熒光探針如TMR和羅丹明123,也能很容易的聚集在功能線粒體上,但是一旦線粒體膜電位喪失即會(huì)被洗掉,從而在一些需要細(xì)胞進(jìn)行醛類固定或者包含線粒體能量狀態(tài)影響因子的實(shí)驗(yàn)中,使其應(yīng)用大受限制,而M 系列探針不受線粒體膜電位影響。 M系列線粒體探針具有多種顏色可以選擇,可根據(jù)情況對(duì)樣品進(jìn)行多色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。除了本試劑盒的紅色熒光探針,我公司還可以提供綠色、藍(lán)色、橙色等顏色的染色試劑盒。 儲(chǔ)存條件:染料-20℃避光保存;避免反復(fù)凍融;稀釋液2-8℃保存。 有效期:六個(gè)月。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
江南卷柏(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fmoc chlorideβ腎上腺能受體激2抗體包裝25g
江藤苷英文名稱: Florisil®腺苷環(huán)化Gα蛋白/Gαs/olf抗體包裝5g
姜黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Magnesium silicate adsorbent(Synthetic)周期蛋白G相關(guān)激抗體包裝1g
姜黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fluazifop-P-butyl solution糖基轉(zhuǎn)移8結(jié)構(gòu)域1抗體包裝5g
姜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Famoxadone solution環(huán)指蛋白27抗體包裝1g
降二氫辣椒堿英文名稱: Flufenoxuron透明質(zhì)結(jié)合蛋白1抗體包裝250mg
降香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: FomesafenG蛋白偶聯(lián)受體激6抗體包裝5g
膠蒼術(shù)甙,羧基蒼術(shù)苷二鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: FlutolanilRho GTP激活蛋白26抗體包裝1g
焦地黃乙甙A1英文名稱: FlusilazoleG蛋白α抑制蛋白1抗體包裝25g
焦地黃乙甙B1英文名稱: Fipronil生長(zhǎng)停滯特異性蛋白6抗體包裝5g
焦性沒(méi)食子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fenobucarb合成抗體包裝100ml
絞股藍(lán)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fenpyroximate血型糖蛋白δ抗體包裝500ml
絞股藍(lán)皂苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fenoxaprop-p-ethyl糖皮質(zhì)激誘導(dǎo)亮拉鏈蛋白抗體包裝25g
絞股藍(lán)皂苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amberlite® IRC-748γ-谷酰轉(zhuǎn)肽6抗體包裝5g
絞股藍(lán)皂苷XLIX(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amberlyst 15 ion-exchange resinG基丁受體δ/GABAA Rδ抗體包裝1g
鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR去乙?;疭irtuin-1試劑盒尿嘧啶;Uracil
芬克纖維微菌Cellulosimicrobium│funkei 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品去乙?;囸I激試劑盒鳥(niǎo)嘌呤;Guanine
鏈霉菌菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR去唾液糖蛋白受體試劑盒L-鳥(niǎo)鹽鹽;L(+)-Ornith
線粒體紅色熒光染色試劑盒-M01Stenotrophomonas rhizophila (可定) 3-氟吡啶-4-酸頻哪酯胰凝乳蛋白Elisa
溜曲霉 10-樟腦磺酰氯腫廇蛋白P63Elisa
黑曲霉 1,7-二溴庚烷色P450 11A;BElisa
燕麥?zhǔn)人嵛鞴蟻喎N* 1,4-二氫-1,4-甲橋萘色P450 17Elisa
金黃硬皮馬勃 亞硫酸酯色P450 19Elisa
金黃色葡萄球金黃亞種 O'-(Carboxymethyl)fluoresceinamide色P450 21Elisa
乳酸乳球乳亞種 3-氟-2-甲氧基苯17β羥基類固脫氫Elisa
金黃色葡萄球金黃亞種 二(1-苯基-異喹啉)(乙酰酮)合銥(III)假尿苷酸合5Elisa
盤(pán)狀肉座 三[1-苯基異喹啉-C2,N]銥(III)假尿苷酸合6Elisa
大腸埃希氏 3,5-二-O-(對(duì)甲苯酰)-2-脫氧-Α-D-呋喃核糖氯轉(zhuǎn)化受體電位陽(yáng)離子通道亞家族V成員6Elisa
黃曲霉 (S)-(+)-薄荷腦二苯基膦90kDa熱休克蛋白β1Elisa
長(zhǎng)白山近藤氏酵母 4-(1-)吡啶HBsAg-preS1Elisa
噴泉鏈霉 Valnoctamide組織蛋白VElisa
pGAPZαA 氚代溴苯氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP線粒體F1復(fù)合體β肽Elisa
無(wú)花果曲霉 2-(噻吩-2-基)乙基對(duì)甲苯磺酸酯CD24分子Elisa