以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
用途: DNA染色 注意事項(xiàng): 鹽酸水解時(shí)間很重要,主要由鹽酸、雪夫試劑、亞等組成。染色結(jié)果為:DNA呈紫紅色,細(xì)胞質(zhì)呈綠色 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
乳酒假絲酵母α1,4-N-乙酰葡糖轉(zhuǎn)移α4Gn-T抗體Human KTN1 ELISA Kit小鼠微管蛋白β3(TUBB3)免疫試劑盒
南海區(qū)交替紅色桿菌芳香乙酰脫乙?;贵wHuman LAMR1/RPSA ELISA Kit小鼠網(wǎng)膜(omentin)免疫試劑盒
路氏腸桿菌芳香乙酰脫乙酰基樣蛋白4抗體Human LANCL1 ELISA Kit小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌基乙二半脫氫磷泛酰巰基乙轉(zhuǎn)移抗體Human Langerin ELISA Kit小鼠脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)免疫試劑盒
融粘帚霉賴戊二還原抗體Human KRT81 ELISA Kit小鼠脫氫表雄硫酯(DHEA-S)免疫試劑盒
F56(蘑菇)錨蛋白重復(fù)域6抗體Human KRT80 ELISA Kit小鼠脫氫表雄(DHEA)免疫試劑盒
黃薄芝精2抗體Human KRT6B ELISA Kit小鼠褪黑(MT)免疫試劑盒
食芽胞桿菌固還原家族1成員C3抗體Human KPNA5 ELISA Kit小鼠突觸融合蛋白2(STX2)免疫試劑盒
大腸埃希菌促腎上腺皮質(zhì)激受體Human KPNA4(Karyopherin subunit alpha-4) ELISA Kit小鼠突觸融合蛋白1A(STX1A)免疫試劑盒
肉色曲霉褐黑相關(guān)蛋白ART抗體Human KPNA6(Karyopherin subunit alpha-6) ELISA Kit小鼠透明質(zhì)結(jié)合蛋白(HABP)免疫試劑盒
中溫富鹽菌腎上腺皮質(zhì)線粒體鐵氧還蛋白抗體Human KPTN ELISA Kit小鼠透明質(zhì)(HA)免疫試劑盒
深褐褶菌Allgrove綜合征相關(guān)蛋白抗體Human KRAP/SSFA2 ELISA Kit小鼠銅藍(lán)蛋白(CP/CER)免疫試劑盒
中國(guó)臺(tái)灣根霉腺相關(guān)病5 VP1抗體Human KRAS(GTPase KRas) ELISA Kit小鼠同型半胱(Hcy)免疫試劑盒
禽腺病Ⅶ型脂肪脫氫抗體Human KLHDC5 ELISA Kit小鼠鐵調(diào)(Hepc)免疫試劑盒
木賊鐮孢抗利尿激1A抗體Human KRR1 ELISA Kit小鼠鐵蛋白(FE)免疫試劑盒
富養(yǎng)羅爾斯通氏菌抗利尿激受體1B抗體Human KRI1 ELISA Kit小鼠天門冬基轉(zhuǎn)移(AST)免疫試劑盒
: AS3.2835資源名稱: 串珠鐮孢 質(zhì)量規(guī)格:BR白三烯C4試劑盒8-香葉草氧基補(bǔ)骨脂
杉木假單胞菌Pseudomonas│cunninghamiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR白三烯B4試劑盒熊果乙酯
堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌Bacillus│firmus 質(zhì)量規(guī)格:分子生物學(xué)級(jí)白介增強(qiáng)子結(jié)合因子2試劑盒細(xì)辛
福爾根DNA染色液(Feulgen Stain)楊樹(shù)菇 4-三氟甲氧基苯γ氨基丁酸B型受體Elisa
布蘭克假絲酵母 3,4,5-三吡啶γ氨基丁酸C型受體Elisa
瑞士乳桿 2,4-二氨基苯氧乙硫酸鹽γ-氨基丁酸運(yùn)載蛋白2Elisa
玉蜀黍赤霉 2-甲基-5-氟卵泡抑Elisa
乳酸乳球霍氏亞種 Boc-D-酪氨酸β-酪蛋白Elisa
尼卡巴κ-酪蛋白Elisa
接骨木鐮孢 4-(三氟甲硫基)αS1-酪蛋白Elisa
釀酒酵母 2,2-二(溴甲基)-1,3-αS2-酪蛋白Elisa
黃綠木霉 1-(4-氟苯基)-2-硝基乙烯β-防御1Elisa
禾谷鐮刀 4-氨基-2,6-二甲氧基嘧啶α-防御6Elisa
根瘤 3-溴苯酰乙α羥基丁酸脫氫Elisa
樺褶孔 4-乙酰乙酸甲酯基質(zhì)衍生因子1βElisa
枯草芽孢桿 1,2,4,5-四氟苯ADP-核糖基轉(zhuǎn)移Elisa
相鄰小孔 1,4-二溴-2,5-二氟苯鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體2Elisa
釀酒酵母 硫酸卡那霉微管相關(guān)蛋白2Elisa