以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
用途: 蘇木素染色 注意事項(xiàng): 染色效果好于普通蘇木素伊紅染色。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,12個(gè)月 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
王不留行(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Acetylcorynoline黑色瘤相關(guān)抗原B2抗體包裝1g
王不留行環(huán)肽A英文名稱: 3-Hydroxy-4-methoxycinnamic acid黑色瘤相關(guān)抗原B4抗體包裝120mg
王不留行環(huán)肽B英文名稱: Isobavachalcone組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移抗體(腦膜瘤表達(dá)抗原5)包裝1g
王不留行黃苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Isobavachin磷化微管相關(guān)蛋白4抗體包裝250mg
威靈仙(綿團(tuán)鐵線蓮)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Angelicin黑色瘤相關(guān)抗原B3抗體包裝1g
威靈仙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Isobergapten鋅指蛋白801抗體包裝5g
維采寧2英文名稱: IsoliquiritinNDUFS2抗體包裝1g
維生B2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ramatroban;BAY u3405NDUFAF4抗體包裝5g
維生D2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Isorhynchophylline分化相關(guān)基因NDRG1抗體包裝100g
維斯阿米-4'-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-...英文名稱: luteolin-6-C-glucoside神經(jīng)降壓抗體包裝25g
偽金絲桃英文名稱: Isoquercitrin核受體輔助抑制因子2抗體包裝25g
偽原薯蕷皂苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Isopimpinellin核仁磷蛋白抗體包裝5g
委陵菜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Isoacteoside嗜中性粒胞漿因子4抗體包裝1g
衛(wèi)矛堿英文名稱: Isochlorogenic acid A磷化核因子NF-κB p65抗體包裝5g
文多靈(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Isochlorogenic acid B磷化一氧化氮合成3(內(nèi)皮型)抗體包裝1g
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR巨噬炎性蛋白3α試劑盒常春藤苷D;Hederacoside D
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%,BR巨噬炎性蛋白2試劑盒常春藤苷C;Hederacoside C
曲霉Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%, 標(biāo)準(zhǔn)品巨噬炎性蛋白1β試劑盒草質(zhì)苷;Rhodionin;Herba
天青石藍(lán)B染色液葡紫紅菇 2-溴-4-甲尿肌酸酐Elisa
紫紅曲霉 2-甲氧基對(duì)苯二酚尿Elisa
凍土毛霉原變型 1,8-二蒽醌尿氮Elisa
三隔鐮刀 2,3-二苯磺酰尿酸Elisa
芽孢桿屬 更昔洛韋尿微量白蛋白Elisa
釀酒酵母 3-溴溴芐檸檬酸合酸Elisa
雙孢菇 3,6-二噠-4-凝溶膠蛋白Elisa
異常威克漢姆酵母 2-巰基噻唑凝血抗凝血復(fù)合物Elisa
大腸埃希 2-溴-5-苯凝血因子ⅦElisa
球孢白僵 3,5-二-2-氟吡啶凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原Elisa
類布氏乳桿 2-氨基-3,4-二凝血因子XIII AElisa
礦泉水 鈣、鎂、、鈉、鍶、硒、偏硅酸 5-溴-2--4-(三氟甲基)吡啶牛血清白蛋白Elisa
栗疫 L-3-溴苯氨酸膀胱腫瘤抗原Elisa
巴氏醋桿 4-甲基噻唑-5-甲皮質(zhì)Elisa
釀酒酵母 2-溴環(huán)己酮皮質(zhì)酮;腎上腺酮Elisa