以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
用途: 主要用于觀察植物組織內(nèi)部的線蟲,特別是根內(nèi)線蟲材料。 注意事項(xiàng): 主要由碘、碘化鉀等組成。 儲存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
釀酒酵母膜粘連蛋白11抗體Human LPPR2 ELISA Kit小鼠血纖蛋白原(Fbg)免疫試劑盒
白耙齒菌膜粘連蛋白13抗體Human LPP ELISA Kit小鼠血纖蛋白(fibrin)免疫試劑盒
雞傷寒沙門氏菌磷化促腎上腺皮質(zhì)激ACTH抗體Human LMNB2 ELISA Kit小鼠血栓B2(TXB2)免疫試劑盒
三葉草根瘤菌磷化蛋白激AKT1抗體Human LPXN ELISA Kit小鼠血栓A2(TXA2)免疫試劑盒
鏈霉菌磷化蛋白激B抗體Human LMF2 ELISA Kit小鼠血栓前體蛋白(TpP)免疫試劑盒
滑菇磷化鈉ATP蛋白a1抗體Human LRAT ELISA Kit小鼠血清淀粉樣蛋白A3(SAA3)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌磷化內(nèi)收蛋白a1抗體Human LRCH1 ELISA Kit小鼠血漿激肽釋放(KLKB1)免疫試劑盒
烯霉鏈霉菌磷化腺苷單磷活化蛋白激α1抗體Human LIN7A ELISA Kit小鼠血紅氧合2(HO-2)免疫試劑盒
麥芽糖假絲酵母磷化腺苷單磷活化蛋白激α2抗體Human LIN28B ELISA Kit小鼠血紅氧合1(HO-1)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌性神經(jīng)酰1抗體Human LITAF ELISA Kit小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子(vWF)免疫試劑盒
玫煙色棒束孢粘附調(diào)節(jié)分子1抗體Human LIN7B(Protein lin-7 homolog B) ELISA Kit小鼠血管舒緩激肽(BK)免疫試劑盒
玉米大斑病菌氣味結(jié)合蛋白抗體Human Liprin alpha 1 ELISA Kit小鼠血管生成樣蛋白4(ANGPTL4)免疫試劑盒
栗疫菌乙脫氫2抗體Human LIV-1 ELISA Kit小鼠血管生成4(ANG-4)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌膜粘連蛋白10抗體Human LMBR1L ELISA Kit小鼠血管生成2(ANG-2)免疫試劑盒
新月彎孢前梯度同源蛋白2抗體Human LMF2 ELISA Kit小鼠血管生成1(ANG-1)免疫試劑盒
污黑腐皮殼乙脫氫5抗體Human LIN7A ELISA Kit小鼠血管生長(ANG)免疫試劑盒
金霉鏈霉菌Streptomyces│aureofaciens 質(zhì)量規(guī)格:>30U/mg,BR半乳糖凝集-7試劑盒野鷲尾苷
豬呼吸與繁殖障礙綜合征病毒Arterivirus│Porcine respiratory and reproductive syndrome virus 質(zhì)量規(guī)格:進(jìn)分,BR半乳糖試劑盒3-乙?;?1-基乳香
: FRI2008033資源名稱: 丁香假單胞菌 質(zhì)量規(guī)格:BR板層相關(guān)多肽2亞型α試劑盒3-乙?;橄?/span>
線蟲活體染色液(碘法)室內(nèi)外電子溫濕度計(jì) 4-氨基-3,5-二硝基吡啶肌球蛋白重鏈αElisa
堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿 萘二異酸酯肌球蛋白重鏈βElisa
黃孢原毛平革 3-(甲基)對氧磷1Elisa
綠色木霉 鹽酸氧磷1Elisa
檸檬黃色紅色桿 1-溴甲基萘附睪蛋白4Elisa
橙黃紅酵母 2-乙氧基-5-硝基吡啶C-C趨化因子18Elisa
季也蒙假絲酵母 二苯并[b,f][1,4]硫氮雜卓-11-[10H]酮利什曼病Elisa
釀酒酵母 3-(4-甲氧基苯甲酰基)酸可溶性白介6受體Elisa
黑木耳 N-氨基-2-甲基啉血小板衍生生長因子AElisa
黑腐皮殼 2-(2'-羥基-5'-叔辛基苯基)苯并三唑血小板衍生生長因子CElisa
蠟狀芽孢桿 (S)-1-Boc-3-羥甲基哌血小板衍生生長因子DElisa
解脂耶氏酵母 嘧啶-4-甲酸纖維介蛋白Elisa
球托霉屬w5株 4-溴嘧啶Bcl2相關(guān)髓白血病序列1Elisa
孟氏假單胞 2-嘧啶抗聚乙二IgM抗體Elisa
根瘤 3--4-溴苯乙磷酸化α-氨基羥甲基惡唑酸Elisa