商品介紹:
HM30181是一種有效的選擇性的P-glycoprotein抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:849675-66-7 別名:HM30181A 純度:97.03% 分子式:C??H??N?O? 分子量:688.73 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
拜氏梭菌Ras信號轉(zhuǎn)導KSR1蛋白抗體Human PLRG1 ELISA Kit心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)ELISA Kit
雷斯青霉血藍蛋白抗體Human PLSCR3 ELISA Kit心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA Kit
赤霉菌腦海綿狀血管畸形蛋白1抗體Human PM20D2 ELISA Kit協(xié)同激分子受體(CMR)ELISA Kit
白靈菇KBP蛋白抗體Human PLXNB1 ELISA Kit小表皮粘蛋白(SBEM)ELISA Kit
地霉半乳糖酵母kappa型阿片受體抗體Human PLK2 ELISA Kit小而密低密度脂蛋白(sLDL)ELISA Kit
慢生根瘤菌激肽原1重鏈抗體Human PMEPA1 ELISA Kit小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)ELISA Kit
赤曲霉鈣激活通道蛋白β1抗體Human PLK3 ELISA Kit小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)ELISA Kit
發(fā)酵畢赤酵母電壓門控性通道蛋白Kv4.2抗體Human LDLR(Low-density lipoprotein receptor) ELISA Kit小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)ELISA Kit
白地霉磷化電壓門控性通道蛋白Kv4.2抗體Human PLK4 ELISA Kit相撲結(jié)合UBC9(UBE2I/UBC9/UBCE9)ELISA Kit
柱孢犁頭霉磷化電壓門控性通道蛋白Kv4.2抗體Human PLK5 ELISA Kit腺相關(guān)病(AAV)ELISA Kit
土生類諾卡氏菌KT3 tag抗體Human PLOD2 ELISA Kit腺苷脫(ADA)ELISA Kit
香豌豆束莖病菌激肽釋放1抗體Human PLUNC ELISA Kit腺苷環(huán)化1(AC-1)ELISA Kit
綠粘帚霉激肽釋放3/舒血管3抗體Human PLSCR4 ELISA Kit腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G2(ABCG2)ELISA Kit
枯草芽胞桿菌激肽釋放4抗體Human PLP2(Proteolipid protein 2) ELISA Kit腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA1)ELISA Kit
檸檬色短小桿菌組蛋白H3賴9甲基化1C抗體Human PLXDC2 ELISA Kit腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白G2(ABCG2)ELISA Kit
鐮刀菌驅(qū)動蛋白家族Member14蛋白抗體Human PLEKHO2 ELISA Kit線粒體肽蛋亞砜還原(MSRA)ELISA Kit
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)類葉升麻苷;麥角甾苷(毛蕊花糖苷)
焦耳Cottricia│pennes 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(T)升麻
地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質(zhì)量規(guī)格:含氮量:23.50-24.30 %升麻苷
P-glycoprotein抑制劑(HM30181)phospho-c-Jun (Ser63) 化原癌因c-Jun抗體Fmoc-L-脯氨 98%
Jun B 活化蛋白激B抗體Fmoc-L-蘇氨 BR
Jun D 活化蛋白激D抗體Fmoc-L-谷氨酰 BR
CK I alpha/STK 屬絲/蘇氨蛋白質(zhì)激抗體L-谷氨二酯鹽鹽 98%
CK II Alpha/STK 屬絲/蘇氨蛋白質(zhì)激抗體L-苯氨酯鹽鹽 98%
CK II alpha/STK 屬絲/蘇氨蛋白質(zhì)激抗體L-苯氨芐酯鹽鹽 98%
P-CK 廣譜角蛋白PCK抗體L-脯氨芐酯鹽鹽 98%
CK18 角蛋白18抗體L-絲氨酯鹽鹽 99%