以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
CHT-L(D)和PGPH(E)肽酶抑制劑 | Seco Rapamycin sodium salt | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Seco-rapamycin是第一個雷帕霉素體內(nèi)開環(huán)代謝物,不影響mTOR,抑制CHT-L(D)(IC50>20μM)和PGPH(E)(IC50=6.45±0.78μM)肽酶,并激活TL(F)肽。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:148554-65-8 別名:Secorapamycin A monosodium 純度:87.02% 分子量:936.15 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
斜頂菌BMP內(nèi)皮調(diào)節(jié)蛋白抗體Human HAL ELISA Kit小鼠低密度脂蛋白(LDL)免疫試劑盒
相思根瘤菌肝病NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8抗體Human HAPLN4 ELISA Kit小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測免疫試劑盒
聚貪氏菌骨形態(tài)發(fā)生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內(nèi)切抗體Human hamartin ELISA Kit小鼠蛋白聚糖4(PRG4)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體Human HAO1 ELISA Kit小鼠蛋白激B(PKB)免疫試劑盒
Nocardioides微管蛋白β輔助因子D抗體Human HAP1 ELISA Kit小鼠膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)免疫試劑盒
非脫羧勒克菌鈣粘蛋白相關(guān)蛋白受體BTR1抗體Human Harmonin ELISA Kit小鼠膽堿乙酰轉(zhuǎn)移(ChAT)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌有絲分裂蛋白BUB3抗體Human HARS2 ELISA Kit小鼠膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)免疫試劑盒
球孢白僵菌p60TRP蛋白抗體Human HAT1 ELISA Kit小鼠膽固(CH)免疫試劑盒
赭色擲孢酵母博萊霉水解抗體Human GYG1 ELISA Kit小鼠單克抗體亞型鑒定免疫試劑盒
釀酒酵母短蛋白聚糖抗體Human GUCY1B3 ELISA Kit小鼠單核趨化蛋白5(MCP-5)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體Human GTSE1 ELISA Kit小鼠單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)免疫試劑盒
耶納農(nóng)球菌巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白12抗體Human GTPBP5 ELISA Kit小鼠單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌堿性亮拉鏈蛋白BZW1抗體Human GUCY2D ELISA Kit小鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)免疫試劑盒
Bacillus tequilensis 骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B抗體Human GUCY1A3 ELISA Kit小鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒
*正紅菇Bcl2相互作用蛋白1抗體(轉(zhuǎn)化相關(guān)基因8蛋白)Human GUCY2F ELISA Kit小鼠大內(nèi)皮(Big ET)免疫試劑盒
豬丹絲菌骨形態(tài)發(fā)生蛋白5抗體Human GUF1 ELISA Kit小鼠大動脈平滑肌肌動蛋白α2(Acta2/Actsa/Actvs)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRβ-轉(zhuǎn)導(dǎo)重復(fù)序列包含蛋白試劑盒雙草鹽
優(yōu)雅食烷菌Alcanivorax│venustensis 質(zhì)量規(guī)格:BRβ抑制蛋白2試劑盒甘草堿
擬諾卡氏菌屬菌種Nocardiopsis│sp. 質(zhì)量規(guī)格:商品級β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白試劑盒沙蟾精
CHT-L(D)和PGPH(E)肽酶抑制劑兔耳草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Coptisine chloride三聚抗體包裝25g
菟絲子(南方菟絲)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lycorine chloride磷化雷帕霉靶蛋白抗體包裝5g
蛻皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betaine hydrochloride黑皮質(zhì)-1受體抗體包裝1g
脫落(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Berbamine hydrochloride胃動抗體包裝25g
脫氫齒孔英文名稱: Leonurine hydrochloride甘露聚糖結(jié)合凝集抗體包裝5g
脫氫紫堇堿;去氫紫堇堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Myricetrin膜相關(guān)環(huán)指蛋白11抗體包裝100g
脫穿心蓮內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tectochrysin結(jié)核分枝桿菌Ag85B抗體包裝25g
脫穿心蓮內(nèi)酯琥珀半酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Senkyunolide A磷化微管相關(guān)蛋白4抗體包裝5g
脫羊藿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oxysophocarpine磷化微管相關(guān)蛋白4抗體包裝100g
脫氧熊果苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Belinostat (PXD101)人痘帶狀皰疹病gE蛋白抗體包裝25g
脫氧野尻霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oxypeucedanin黑色瘤相關(guān)抗原G1/肝癌相關(guān)蛋白4抗體包裝25g
拓?fù)涮婵蝶}鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Crotaline;Monocrotaline黑色瘤相關(guān)抗原B6抗體包裝5g
瓦松(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Scularin黑色瘤相關(guān)抗原C2抗體包裝1g
萬丈深(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Scularein黑色瘤抗原樣基因2抗體包裝25g
萬丈深(綠莖還陽參)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 8-O-Acetyl shanzhiside methyl ester黑色瘤相關(guān)抗原C1抗體包裝5g