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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-21 13:11:01瀏覽次數(shù)：300
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T-200T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X9681 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | Mycoplasma Detection Kit |
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：支原體檢測(cè)試劑盒
英文名稱：Mycoplasma Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格：100T-200T
發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹：
本試劑盒是利用熒光染料檢測(cè)支原體污染。這種染料會(huì)結(jié)合到DNA的A-T富集區(qū)域，因?yàn)橹гw的DNA中A-T含量高(55％～80％)，所以可將其染色而被檢測(cè)到。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點(diǎn)，即為支原體的DNA染色斑，說明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后，大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。 操作步驟： 貼壁細(xì)胞： 1.被檢細(xì)胞接種于無菌的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種密度為1-2×104。同時(shí)，接種正常無支原體感染的同種細(xì)胞，作為陰性對(duì)照。 2.5天后，先吸去培養(yǎng)液，再加入1ml的固定液，靜置20min， 3.吸去固定液，晾干。 4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞)，37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min。 5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。 6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。 懸浮細(xì)胞： 1.收集需檢測(cè)的細(xì)胞，1500rpm，5min。 2.將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上，再加1ml的固定液，靜置20min。 3.吸去固定液，晾干。 4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞)，37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。 5.吸去Hoechst 33258工作液，用無菌水洗滌玻片3次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。 6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)英文名稱：8-OHdG ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框194抗體包裝1g
70kDa熱休克蛋白8(HSPA8)英文名稱：HSPA8 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框198抗體包裝25g
70kDa熱休克蛋白5(HSPA5)英文名稱：HSPA5 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框21抗體包裝5g
70kDa熱休克蛋白1A(HSPA1A)英文名稱：HSPA1A ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框216抗體包裝1g
60kD熱休克蛋白(HSPD1)英文名稱：HSPD1 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框43抗體包裝25g
5羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(SERT)英文名稱：SERT ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框50抗體包裝5g
5-羥色胺(5-HT)英文名稱：5-HT ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框49抗體包裝1g
5-羥基乙(5-HIAA)英文名稱：5-HIAA ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框53抗體包裝5g
50kDa核孔蛋白(NUP50)英文名稱：NUP50 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框54抗體包裝1ml
27kDa熱休克蛋白(HSPB1)英文名稱：HSPB1 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框55抗體包裝5g
25-羥基維生D3(HVD3)英文名稱：HVD3 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框56抗體包裝100g
25kDa突觸關(guān)聯(lián)蛋白(SNAP25)英文名稱：SNAP25 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框65抗體包裝25g
210kDa核孔蛋白(NUP210)英文名稱：NUP210 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框64抗體包裝100g
20S-蛋白體(20S-PSM)英文名稱：20S-PSM ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框69抗體包裝25g
2',5'-寡腺苷合成1(OAS1)英文名稱：OAS1 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框77抗體包裝500g
馬氏副球菌Paracoccus│marcusii 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,三合物胰脂肪試劑盒異槲皮苷;Isoquercitrin
海假交替單胞菌Pseudoalteromonas│marina 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品胰抑制試劑盒異鼠李-3-O-新橙皮苷;Isorha
結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR胰腺癌標(biāo)志物CA242 原蘇木B;Protosappanin
支原體檢測(cè)試劑盒枯斑擬盤多毛孢 3-氯-4-甲酰苯酸,95%磷酸二酯2Elisa
硬水黃桿 1-氟吡啶四氟酸鹽過氧化物Elisa
熱纖梭* ,4,6-基吡啶三氟磺酸鹽RecQ解旋樣蛋白5Elisa
肺形側(cè)耳 (R)-3-氨基四鹽酸鹽載脂蛋白AElisa
纖維鏈霉 乙二二硫代縮氨基脲脂蛋白AElisa
茄鏈格孢 N-Boc-L-環(huán)己基甘氨表皮調(diào)節(jié)Elisa
叢毛單胞 1-甲基吲唑-4-羧酸Derlin1蛋白Elisa
戊糖片球 Boc-1-氨基環(huán)烷甲血清運(yùn)鐵蛋白受體Elisa
布魯氏 生物Ⅵ型 戊酸鈉原鈣黏1Elisa
變紫青霉 2-氯-3-甲基-4-(甲基磺酰)雌酮Elisa
尖孢鐮刀胡麻專化型 5-氨基-2-三氟甲基吡啶顆粒蛋白前體Elisa
梨形毛霉 O,O-二乙基二硫代磷酸銨, 一般為谷氨酸受體2AElisa
屎腸球 庚酸乙酯生長(zhǎng)分化因子7Elisa
中慢生華癸根瘤 4,4'-亞甲基-雙(3-氯-2,6-二乙基苯)骨成型蛋白8AElisa
枯草芽孢桿 1-(2-芐氧基-4-氟苯基)乙酮生長(zhǎng)分化因子6Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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