以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
吖啶橙-EB雙染色試劑盒 | Acridine Orange(AO)/EB Double Stain Kit | 50ml*2|250ml*2 | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
橙能透過胞膜完整的細(xì)胞,嵌入細(xì)胞核DNA,與雙鏈DNA結(jié)合后發(fā)出綠色熒光,溴化乙錠(EB)僅能透過胞膜受損的細(xì)胞,嵌入核DNA,發(fā)橘紅色熒光。凋亡的細(xì)胞呈現(xiàn)為染色增強(qiáng),熒光更為明亮,均勻一致的圓狀或固縮狀、團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)。非凋亡細(xì)胞核呈現(xiàn)熒光深淺不一的結(jié)構(gòu)樣特征。二者很容易判別。在熒光顯微鏡下觀察,可見四種細(xì)胞形態(tài):活細(xì)胞(VN),核染色質(zhì)著綠色并呈正常結(jié)構(gòu);早期凋亡細(xì)胞(VA),核染色質(zhì)著綠色呈固縮狀或圓珠狀;晚期凋亡細(xì)胞(NVA),核染色質(zhì)為橘紅色并呈固縮狀或圓珠狀;非凋亡的死亡細(xì)胞(NVN),核染色質(zhì)著橘紅色并呈正常結(jié)構(gòu)。本產(chǎn)品AO、EB溶液濃度分別為100ug/ml,所含穩(wěn)定劑不影響實(shí)驗(yàn)效果。 使用方法:(僅供參考) 使用前先根據(jù)用量,將AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液,先用現(xiàn)配。 對于貼壁細(xì)胞或爬片,去掉培養(yǎng)基,用PBS洗兩遍去除殘余培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞,加入新的PBS;如果需要觀察全部細(xì)胞特性,保留未貼壁細(xì)胞,可以直接在培養(yǎng)基中加入工作液。按照每毫升培養(yǎng)基或PBS中加入20ul工作液即可。室溫放置2-5min后于熒光顯微鏡下觀察。 對于懸浮細(xì)胞,可直接加入工作液或離心收集細(xì)胞后在PBS中加入工作液。按照每毫升培養(yǎng)基或PBS中加入20ul工作液即可。室溫放置2-5min后于熒光顯微鏡下觀察。 注意事項(xiàng): 含酚紅培養(yǎng)基對觀察有輕微影響。建議使用無酚紅培養(yǎng)基。 染色液工作濃度和染色時(shí)間可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況適當(dāng)調(diào)整,以期達(dá)到佳效果。 儲存條件:4℃避光密封保存,有效期一年 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
Ⅱ型前膠原基端原肽(PⅡNT)英文名稱:PⅡNT ELISA Kit磷化熱休克蛋白β5/α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體包裝50mg
Ⅱ型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTXⅡ)英文名稱:CTXⅡ ELISA Kit1號染色體開放閱讀框167抗體包裝1g
Ⅱ型膠原(COL2)英文名稱:COL2 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框168抗體包裝250mg
ⅡD組磷脂A2(PLA2G2D)英文名稱:PLA2G2D ELISA Kit1號染色體開放閱讀框170抗體包裝250mg
ⅡA組磷脂A2(PLA2G2A)英文名稱:PLA2G2A ELISA Kit1號染色體開放閱讀框172抗體包裝1g
Ⅰ型前膠原羧基端原肽(PⅠCP)英文名稱:PⅠCP ELISA Kit1號染色體開放閱讀框173抗體包裝5g
Ⅰ型前膠原基端原肽(PⅠNP)英文名稱:PⅠNP ELISA Kit1號染色體開放閱讀框174抗體包裝25g
Ⅰ型前膠原(PCⅠ)英文名稱:PCⅠ ELISA Kit1號染色體開放閱讀框177抗體包裝5g
Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTXⅠ)英文名稱:CTXⅠ ELISA Kit1號染色體開放閱讀框180抗體包裝1g
Ⅰ型膠原交聯(lián)基端肽(NTXⅠ)英文名稱:NTXⅠ ELISA Kit1號染色體開放閱讀框182抗體包裝1g
Ⅰ型膠原α2(COL1α2)英文名稱:COL1α2 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框183抗體包裝25g
Ⅰ型膠原α1(COL1α1)英文名稱:COL1α1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框187抗體包裝5g
Ⅰ型膠原(COL1)英文名稱:COL1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框189抗體包裝5g
90kDa熱休克蛋白β1(HSP90β1)英文名稱:HSP90β1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框190抗體包裝100ml
90kDa熱休克蛋白αA1(HSP90αA1)英文名稱:HSP90αA1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框192抗體包裝25ml
輪枝菌Verticillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品乙肝表面抗原大蛋白試劑盒原花青B2;Procyanidin B
球孢白僵菌Beauveria│bassiana (Bals.-Criv.) Vuill. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR乙脫氫試劑盒原花青B1;Procyanidin B
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品乙呋試劑盒乙酰紫堇靈;Acetylcorynoli
吖啶橙-EB雙染色試劑盒 叔丁基二硫抗mannobioside糖抗體Elisa
亮白曲霉 2,2-二氟-3-羥基戊酸乙酯鋅-α2脂蛋白Elisa
烏克蘭毛霉 2-溴-3,4-二氟苯巖藻糖基化觸珠蛋白Elisa
短柄帚霉 6-甲基-3H-噻吩[2,3-d]嘧啶-4-酮膽固-25-羥化Elisa
鼠李糖乳桿 氯磺酚S受體自身抗體Elisa
產(chǎn)氣腸桿* 3,5-二溴-2-氯吡受體Elisa
新疆鹽單胞 5-溴-4-甲基-1H-吲唑S轉(zhuǎn)移Mu1Elisa
禾谷鐮孢 2-氯-3-氟-5-硝基吡啶乙酰CoA羧化Elisa
總狀共頭霉 噻吩并[3,2-b]吡啶-7-蛋白激M2Elisa
大孢聯(lián)軛霉 5-溴吲唑-3-甲酸系統(tǒng)性紅斑狼瘡IgGElisa
黑曲霉 2-乙硫基-5-硝基吡啶系統(tǒng)性紅斑狼瘡IgAElisa
圍小叢殼 L-肌肽鋅系統(tǒng)性紅斑狼瘡IgMElisa
蠟樣芽胞桿 4-苯氧基芐糖化血紅蛋白Elisa
博斯氏屬 2-叔丁苯纖維蛋白單體Elisa
葉球形微桿 4,6-二氯-2-甲氧基嘧啶酮酸激M2Elisa