以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Amiloride hydrochloride是一種具有相對選擇性的sodium channel(ENaC)抑制劑,高血壓和充血性心力衰竭。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:2016-88-8 別名:MK-870 hydrochloride 純度:98.0% 分子量:266.09 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
枯草芽孢桿菌枯草亞種磷化表皮生長因子受體抗體Human PGR(Progesterone receptor) ELISA Kit犬促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)免疫試劑盒
木耳Au888磷化表皮生長因子受體抗體Human FSCB (Fibrous sheath CABYR-binding protein) ELISA KIT犬促腎上皮質(zhì)激釋放激(CRH)免疫試劑盒
彩色豆馬勃磷化表皮生長因子受體抗體Human FSIP1 (Fibrous sheath-interacting protein 1) ELISA KIT犬促卵泡(FSH)免疫試劑盒
暗擬莖點(diǎn)霉*磷化表皮生長因子受體抗體Human ARSD(Arylsulfatase D) ELISA Kit犬促甲狀腺(TSH)免疫試劑盒
黑曲霉磷化表皮生長因子受體抗體Human EVX1 (Homeobox even-skipped homolog protein 1) ELISA KIT犬雌激(E)免疫試劑盒
圍小叢殼菌磷化表皮生長因子受體抗體Human FCGR2C (Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-c) ELISA KIT犬雌二(E2)免疫試劑盒
球孢白僵菌磷化表皮生長因子受體抗體Human EVX2 (Homeobox even-skipped homolog protein 2) ELISA KIT犬成纖維生長因子23(FGF23)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌磷化表皮生長因子受體抗體Human FCHSD2 (F-BAR and double SH3 domains protein 2) ELISA KIT犬不對稱二甲基精(ADMA)免疫試劑盒
青霉屬磷化表皮生長因子受體抗體Human SLC30A3(Zinc transporter 3) ELISA Kit犬表面活性蛋白D(SP-D)免疫試劑盒
耐堿馬賽菌磷化表皮生長因子受體抗體Human EWSR1 (RNA-binding protein EWS) ELISA KIT犬表達(dá)于SiSo系的受體結(jié)合型腫瘤抗原(EBAG9)免疫試劑盒
炭黑曲霉磷化表皮生長因子受體抗體Human FCHO1 (F-BAR domain only protein 1) ELISA KIT犬半胱蛋白抑制劑/胱抑C(Cys-C)免疫試劑盒
黑附球菌磷化表皮生長因子受體抗體Human EXO5 (Exonuclease V) ELISA KIT犬白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒
八孢裂殖酵母磷化表皮生長因子受體抗體Human EXTL1 (Exostosin-like 1) ELISA KIT犬白介7受體(IL7R)免疫試劑盒
弗雷德里克斯堡假單胞菌磷化轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體Human FCHO2 (F-BAR domain only protein 2) ELISA KIT犬白介6(IL-6)免疫試劑盒
小奧德蘑磷化轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體Human FCGR2C (Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-c) ELISA KIT犬白介4(IL-4)免疫試劑盒
三骨菇磷化轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體Human EVX2 (Homeobox even-skipped homolog protein 2) ELISA KIT犬白介2(IL-2)免疫試劑盒
刺孢小克銀漢霉原變種Cunninghamella│echinulata var. echinulata 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品對羥基
淡紫擬青霉Paecilomyces│lilacinus (Thom) Samson 質(zhì)量規(guī)格:0.100mg/ml對羥基
竹喙球菌Ceratosphaeria│phyllostachydis Zhang 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,95%靛玉紅
ENaC抑制劑(Amiloride hydrochloride)化琥珀酰膽堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amidopyrine/aminopyrine1號染色體開放閱讀框229抗體包裝1g
化(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Angiotensin II肽/天蠶抗菌肽抗體包裝25g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vitamin D3Cullin 4a蛋白抗體包裝5g
化乙酰膽堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Pazopanib HCl角蛋白3抗體包裝250mg
解磷定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tiotropium bromide anhydrous 5號染色體開放閱讀框52抗體包裝10mg
雷他定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Formoterol fumarate 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白85B抗體包裝50mg
霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Formoterol fumarate 緊密連接蛋白14抗體包裝1g
霉二物(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Faropenem sodium人巨病單克抗體包裝100g
美扎(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Faropenem sodium癌胚抗原抗體包裝25g
諾昔康(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Orlistat(synthesis)表面趨化因子受體3抗體包裝500g
普噻噸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rifamycin sodium salt1號染色體開放閱讀框33抗體包裝1g
羥吡啶;吡多(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Octreotide acetate磷化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP α 抗體包裝5g
屈膦二鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (S)-(+)-2-Amino-1-butanol 磷化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP β抗體包裝100ml
噻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: trans-D-erythro-sphingosine磷化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP β抗體包裝25ml
噻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ribophytosphingosine hydrochloride磷化整合β2/Integrin β2抗體包裝1g