以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
長鏈二烷基羰花青化合物,特別是Dil,廣泛應(yīng)用于固定和非固定的組織與細(xì)胞中,進(jìn)行順行或逆行的神經(jīng)示蹤分析。Dil 不會影響細(xì)胞的活力、生長以及基本生理特性。 Dil 標(biāo)記運動神經(jīng)元,可在培養(yǎng)基條件下持續(xù)跟蹤長達(dá)四周,在體內(nèi)長達(dá)一年。染料通過在質(zhì)膜中的緩慢橫向擴散均勻標(biāo)記神經(jīng)元,0.2~0.6mm/每天/固定標(biāo)本,在活體組織里,可以達(dá)到6mm/每天。經(jīng)過醛固定的組織,Dil 的擴增可以持續(xù)長達(dá)1~2 年。一般情況下未標(biāo)記的染料不會向非標(biāo)記的細(xì)胞轉(zhuǎn)移,除非質(zhì)膜被破壞,比如切片部位。DiD(MW:959.91) 儲存:-20℃,避光,有效期12個月。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
蟾靈;蟾酥靈(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1,3-DihydroxynaphthaleneFMS樣酪激3配體抗體包裝250mg
長春里寧英文名稱: 1,4-3,6-Dianhydro-D-mannitol堿性成纖維生長因子9抗體包裝25g
長春新堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1,4-Cyclohexanedione原癌基因酪蛋白激FES抗體包裝100g
常春藤苷C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1,4-Diaminoanthraquinone成纖維生長因子16抗體包裝25g
常春藤苷D英文名稱: 1,4-Dihydroxyanthraquinone成纖維激活蛋白α抗體包裝5g
常春藤苷H;灰氈毛忍冬次皂苷英文名稱: 1,5-DiaminonaphthaleneFas相關(guān)磷1抗體包裝1g
常春藤皂苷元(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1,5-Dihydroxynaphthalene葉受體4抗體包裝25g
常春藤皂苷元-28-O-β-D-葡萄糖酯苷英文名稱: 1,6-DihydroxynaphthaleneWnt信號受體蛋白抗體包裝5g
常山(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1,8-Octanediol磷化載脂蛋白A1抗體包裝1g
巢脾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1-Acetonaphthone磷化載脂蛋白A1抗體包裝25g
朝藿定A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1-Adamantanol磷化堿性成纖維生長因子受體1抗體包裝5g
朝藿定A1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1-Bromonaphthalene脂肪酰解1抗體包裝100g
朝藿定C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1-Bromooctane外基質(zhì)蛋白FRAS1抗體包裝25g
車前草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1-Methylimidazole富馬合抗體包裝500g
車前草(車前)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1-Ethylimidazole成纖維生長因子21抗體包裝5g
: IFO14900FRIBP2535ATCC33849資源名稱: 大腸埃希氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%生長分化因子-9試劑盒七葉樹皂苷B;Aesculuside B
膠孢Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品生長分化因子3試劑盒8-去乙?;釣鯄A;8-deacetyl
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%生長分化因子2試劑盒羥基吳茱萸堿;Hydroxyevodia
細(xì)胞膜紅色熒光染料(DiD)孔曲霉 2,3-二氮雜萘二肽基肽ⅥElisa
枯草芽孢桿枯草亞種 3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊烷-2-基)甲苯胸苷酸磷酸化Elisa
炭黑曲霉 (R)-(-)-3-喹寧外膜蛋白AElisa
蠟狀芽孢桿 二異苯(異構(gòu)體混合物)精氨酸;絲氨酸豐富剪接因子1Elisa
弗氏檸檬酸 芐氧羰基-N-芐基-Beta-氨酸胸腎表達(dá)趨化因子Elisa
解脂復(fù)膜孢酵母(亞羅解脂酵母) 2-叔丁基環(huán)己基乙酸酯胱硫Elisa
鮑魚菇 反式4-甲基環(huán)己解脲支原體Elisa
粉紅單端孢霉 3-(3,4,5-氧基苯基)酸奈瑟Elisa
豬丹絲 雙(2,2,6,6-四甲基-4-基)癸二酸酯氮氧自由基磷酸絲氨酸Elisa
玉米大斑病 環(huán)磷酸羥基酮酸Elisa
厚垣孢普可尼亞 3-氟-4-氯苯乙3-磷酸甘油酸酯Elisa
米蘭農(nóng)霉 3-氟-4-氯苯乙屋塵螨變應(yīng)原Derp1 IgE抗體Elisa
墨西哥假黃色單胞 硫酸銨鋁,99.99%(metalsbasis)β-內(nèi)酰Elisa
枯草芽孢桿 1-甲基-4-甲氧羰基吡唑-5-磺酰新型抑癌基因X連鎖凋亡抑制蛋白相關(guān)因子-1Elisa
細(xì)黃鏈霉 2-(2-氯苯氧基)酸乳酸脫氫Elisa