產(chǎn)品屬性:
中文名稱:γ-secretase抑制劑(DAPT)
英文名稱:DAPT
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
DAPT是一種γ-secretase抑制劑,作用于HEK293細(xì)胞,降低總β-淀粉樣蛋白產(chǎn)量,IC50為20nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):208255-80-5 別名:GSI-IX 純度:99.25% 分子式:C??H??F?N?O? 分子量:432.46 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
粘著劍菌線粒體鈉/氫交換蛋白質(zhì)2抗體Human CEBPD(CCAAT/enhancer Binding Protein(C/EBP), delta) ELISA Kit人抗紅抗體(RBC)ELISA Kit
喇叭菌神經(jīng)元1抗體Human BAX(Apoptosis regulator BAX) ELISA Kit人抗核周因子抗體(APF)ELISA Kit
豆芽菌1-2神經(jīng)肽Y抗體Human MAPK1(Mitogen-activated protein kinase 1) ELISA Kit人抗核小體抗體IgG(AnuA-IgG)ELISA Kit
枯草芽孢桿菌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體Human CTLA4(Cytotoxic T-lymphocyte protein 4) ELISA Kit人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)ELISA Kit
球孢白僵菌谷受體2B抗體Human CEACAM1(Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1) ELISA Kit人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)ELISA Kit
單胞菌屬神經(jīng)纖毛蛋白2抗體Human C9(Complement component C9) ELISA Kit人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA Kit
枯斑擬盤多毛孢谷受體2D抗體Human BCL11B(B-cell lymphoma/leukemia 11B) ELISA Kit人抗核仁抗體(ANA)ELISA Kit
香栓孔菌原癌基因N-Ras抗體Human CCL28(C-C motif chemokine 28) ELISA Kit人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)ELISA Kit
耐鹽考克氏菌T激活核轉(zhuǎn)錄因子4抗體Human NPS(Neuropeptide S) ELISA Kit人抗核抗體(ANA)ELISA Kit
地下鹽單胞菌腦低密度脂蛋白受體蛋白1抗體Human GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) ELISA Kit人抗骨骼肌抗體(ASA)ELISA Kit
蘇云金芽孢桿菌軸突蛋白2抗體Human CD28(T-cell-specific surface glycoprotein CD28) ELISA Kit人抗弓形體IgM抗體(anti-tox IgM)ELISA Kit
殼菌腎小球粘附分子受體抗體Human APOA2(Apolipoprotein A-II) ELISA Kit人抗高爾基體抗體(AGAA)ELISA Kit
變粉紅鎖擲孢酵母神經(jīng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)蛋白1抗體Human CD276(CD276 antigen) ELISA Kit人抗肝膜抗體(LMA)ELISA Kit
污黑腐皮殼軸突生長(zhǎng)誘向因子G2抗體Human CTSL2(Cathepsin L2) ELISA Kit人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)ELISA Kit
類干酪乳桿菌黑色瘤硫軟骨蛋白多糖4抗體Human COR(Cortisol) ELISA Kit人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)ELISA Kit
金黃色葡萄球菌NDST1蛋白抗體Human GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) ELISA Kit人抗肝PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體-IgM(HIT)ELISA Kit
彎曲芽孢桿菌Bacillus│flexus 質(zhì)量規(guī)格:>250U/mg,BR苦杏仁苷
芽孢桿菌屬Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>2500U/MG絞股藍(lán)皂苷
雅致放射毛霉Actinomucor│elegans 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR金絲桃
γ-secretase抑制劑(DAPT)Phospho-FHIT (Tyr114) 化脆性組氨三聯(lián)體抗體銦 SP
G protein beta subunit GI G蛋白/鳥(niǎo)苷結(jié)合蛋白抗體鉛 flakes,SP
SLK/Fyn 酪氨蛋白激Fyn(同步原癌因)抗體鉛 99.99%,powder
GABA 兔抗γ1氨丁抗體鉛 99.999%,粒狀,1-3mm
Gab1 接頭蛋白Gab 1抗體水質(zhì)鉛標(biāo)樣 1.0mg/l,分析標(biāo)準(zhǔn)品
Phospho-Gab1 (Tyr627) 化接頭蛋白Gab 1抗體高純硫 99.99% metals basis
Phospho-Gab1 (Tyr659) 化接頭蛋白Gab 1抗體高純硫 99.999% metals basis
Gab2 接頭蛋白Gab 2抗體高純硫 分析標(biāo)準(zhǔn)品
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)