商品介紹:
在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V 被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V 進行熒光素PE 標記,以標記了的Annexin V 作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。 7-AAD(7-amino-actinomycin D)是一種核酸染料,它不能通過正常質(zhì)膜,隨著細胞凋亡、細胞死亡過程,質(zhì)膜對7-AAD 的通透性逐漸增加,結(jié)合細胞凋亡中DNA 的有控降解,在合適波長激發(fā)光的激發(fā)下可發(fā)出明亮的紅色熒光,通過7-AAD 標記DNA 的強弱,將細胞分為三群:7-AAD 強為死亡細胞,7-AAD 弱是凋亡細胞,7-AAD-為正?;盍毎?。7-AAD 同PI 有著相似的熒光特性,但其發(fā)射波譜較PI 窄,對其他檢測通道的干擾更小,在多色熒光分析中是PI 的佳替代品,可與Annexin V-PE 聯(lián)合使用。 本試劑盒可應用于培養(yǎng)細胞凋亡檢測(不推薦用于檢測組織樣本)。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
基質(zhì)金屬蛋白3(MMP-3)英文名稱:MMP-3 ELISA Kit丁?;铣?抗體包裝5g
基質(zhì)金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)英文名稱:MMP-2/Gelatinase A ELISA Kit脂肪源性亮基肽抗體(血管內(nèi)皮生長因子誘導蛋白)包裝1g
基質(zhì)金屬蛋白13(MMP-13)英文名稱:MMP-13 ELISA Kit線粒體凋亡誘導因子2抗體包裝250mg
基質(zhì)金屬蛋白10(MMP-10)英文名稱:MMP-10 ELISA KitABL2蛋白抗體包裝1g
基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)英文名稱:MMP-1 ELISA Kit血管緊張轉(zhuǎn)換ACE1抗體包裝5g
基質(zhì)γ羧基谷蛋白(MGP)英文名稱:MGP ELISA Kit血管緊張轉(zhuǎn)換2抗體包裝100ml
肌激同工MM(CK-MM)英文名稱:CK-MM ELISA KitAcinus抗體包裝25ml
肌激同工MB(CK-MB)英文名稱:CK-MB ELISA Kit醋激1抗體包裝100ml
肌激(CK)英文名稱:CK ELISA Kit促腎上腺皮質(zhì)激(1-39)抗體包裝25ml
肌生成抑制(MSTN)英文名稱:MSTN ELISA Kit促腎上腺皮質(zhì)激ACTH(18-39)抗體包裝1g
肌球蛋白重鏈(MHC)英文名稱:MHC ELISA Kit促腎上腺皮質(zhì)激ACTH (7-23)抗體包裝25g
肌球蛋白(MYS)英文名稱:MYS ELISA Kit活性依賴的神經(jīng)保護肽抗體包裝100g
肌紅蛋白(MYO/MB)英文名稱:MYO/MB ELISA Kitα1性糖蛋白1/類粘蛋白1抗體包裝25g
肌酐(Cr)英文名稱:Cr ELISA Kitα1性糖蛋白2抗體(類粘蛋白2)包裝1g
肌鈣蛋白T(Tn-T)英文名稱:Tn-T ELISA Kit磷化通道蛋白2抗體包裝25g
鹽轉(zhuǎn)運三磷腺苷抗體血紅結(jié)合蛋白(HPX)Tofacitinib (CP-690550,Tasocitinib) is a novel inhibitor of JAK3 with IC50 of 1
Annexin V-PE/7-AAD雙染細胞凋亡檢測試劑盒陰溝腸桿(陰溝腸桿陰溝亞種) (6-芐基-6H-吡咯[3,4-B]吡啶-5,7-二酮)富含半胱氨酸型酸性蛋白檢測試劑盒
糞腸球 乙蟲富亮氨酸α2糖蛋白1檢測試劑盒
大麗花輪枝孢(棉花黃萎?。?/span> 5-硝基-1H-吡唑-3-羧酸甲酯鈣泵檢測試劑盒
肺炎克雷伯 4-羥基吖啶鈣離子通道抗體檢測試劑盒
大腸埃希氏桿 5-氯-3-硝基-2-基吡啶鈣調(diào)素;鈣調(diào)蛋白檢測試劑盒
黑腐皮殼 6-溴喹啉-2-酮鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2檢測試劑盒
河北木霉 2-(2-氯乙酰氨基)-5-硝基-2'-氯二苯甲酮鈣網(wǎng)蛋白檢測試劑盒
滑假絲酵母 2-溴-4-甲基-6-氟吡啶鈣衛(wèi)蛋白檢測試劑盒
香蕉 6-氨基-5-溴煙酸甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶檢測試劑盒
靈芝(紅芝, 赤芝) 2-(1H-吡唑-4-基)乙甘酸-N-甲基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒
泰塔溫沙壤土桿 4-甘露聚糖結(jié)合凝集素絲氨酸肽酶-2檢測試劑盒
中慢生華癸根瘤 1-(4-三氟甲基嘧啶-2-基)哌甘露聚糖結(jié)合凝集素相關絲氨酸蛋白酶檢測試劑盒
肉梭 素C型 6-甲氧基-7-芐氧基喹唑啉-4-酮甘露糖結(jié)合蛋白;甘露糖結(jié)合凝集素檢測試劑盒
炭黑曲霉 3-叔丁氧?;s環(huán)庚烷甘露糖受體檢測試劑盒
芽胞桿 4-乙氧基-3-硝基吡啶甘油-3-磷酸脫氫酶檢測試劑盒