以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
MTT細(xì)胞增值與毒性檢測試劑盒 | MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit | 500T | 1~3天 |
商品介紹:
MTT可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan,在特定溶劑存在的情況下,可以被*溶解,然后通過酶標(biāo)儀可以測定490nm波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快,則吸光度越高;細(xì)胞毒性越大,則吸光度越低。 使用說明: 1.收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,分于96孔板,每孔180μL,3000-10000個(gè)細(xì)胞/孔。 2.置37℃、5%CO2溫箱培養(yǎng)使細(xì)胞貼壁,培養(yǎng)6-24小時(shí)。 3.加入適當(dāng)濃度的受試化合物,繼續(xù)培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間。 4.小心吸去上清,加入90μL新鮮培養(yǎng)液,再加入10μL MTT溶液,繼續(xù)培養(yǎng)4 h。 5.然后吸掉上清,每孔加入110μL Formazan溶解液,置搖床上低速振蕩10 min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490 nm處測量各孔的吸光值。 6.同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、 Formazan溶解液),對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、 Formazan溶解液),每組設(shè)定3復(fù)孔。 儲(chǔ)存條件:-20℃ |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
D-二聚體(D2D)英文名稱:D2D ELISA Kit原癌蛋白CBL2抗體包裝5g
D-多巴色變位(DDT)英文名稱:DDT ELISA Kit信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α抗體包裝1g
DNA修復(fù)蛋白R(shí)AD50(RAD50)英文名稱:RAD50 ELISA Kit信號(hào)淋巴活化分子CD150抗體包裝5g
DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子3(DDIT3)英文名稱:DDIT3 ELISA Kit巨噬炎性蛋白16抗體包裝10g
DNAⅠ樣蛋白3(DNASE1L3)英文名稱:DNASE1L3 ELISA Kit果蠅CG6856-PA抗體包裝5g
DNA基轉(zhuǎn)移3B(DNMT3B)英文名稱:DNMT3B ELISA Kit色c氧化COX7A2抗體包裝1g
DNA基轉(zhuǎn)移1(DNMT1)英文名稱:DNMT1 ELISA Kit剪切和多聚腺苷化特異性因子4抗體包裝25g
DNA激活蛋白激催化亞基肽(PRKDC)英文名稱:PRKDC ELISA Kit組織蛋白E抗體包裝5g
Discs大同源物4(DLG4)英文名稱:DLG4 ELISA Kit緊密連接蛋白5抗體包裝25g
Discoidin域受體家族成員1(DDR1)英文名稱:DDR1 ELISA Kit分化周期CDC42相互作用蛋白4抗體包裝5g
Dickkopf相關(guān)蛋白4(DKK4)英文名稱:DKK4 ELISA Kit周期蛋白依賴性激樣3抗體包裝100ml
Dickkopf相關(guān)蛋白1(DKK1)英文名稱:DKK1 ELISA Kit殺菌肽/天蠶抗菌肽單克抗體包裝25ml
C組著色性干皮病偶聯(lián)因子(XPC)英文名稱:XPC ELISA Kit第十七號(hào)染色體開放閱讀框87抗體包裝1g
C-型鈉尿肽(CNP)英文名稱:CNP ELISA Kit降鈣受體抗體包裝25g
C-肽(C-Peptide)英文名稱:C-Peptide ELISA Kit補(bǔ)體C2a鏈多肽抗體包裝5g
蠟樣芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格:purity>97%,BR乙型肝炎病e抗原試劑盒野鷲尾苷;Lridin
: ivcas7.00265資源名稱: 球形賴芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,單醋鹽乙型肝炎病e抗體試劑盒芫花;Genkwanin
百日咳博德特氏菌Bordetella│pertussis 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR乙型肝炎表面抗原試劑盒3-乙酰基乳香 ;alpha-bosw
MTT細(xì)胞增值與毒性檢測試劑盒樟疫霉 4-氯-3,5-二氟載脂蛋白A5Elisa
擬康寧木霉 3-溴-6,9-二苯基-9H-咔唑煙酰Elisa
擬青霉 3-氨基-N-CBZ-吡咯烷鹽酸鹽結(jié)核桿IgM抗體Elisa
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 Cbz-1-氨基-1-環(huán)基線粒體呼吸鏈復(fù)合物IElisa
蓋氏海桿狀 5-溴乙?;?2-羥基苯甲N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)受體A1亞單位NR4Elisa
帚狀曲霉 7-基啉15脂加氧1Elisa
大腸埃希 2-氨基-3-氟苯藍(lán)氏賈第鞭毛蟲Elisa
粘孢白僵 DL-脯氨酰鹽酸鹽β-乳球蛋白Elisa
黃曲霉 [1,3-雙(2,4,6-三基)-2-咪唑烷亞基][(苯硫基)亞甲基](三環(huán)己基膦)二氯化釕酪蛋白Elisa
棒形青霉 N,N-雙叔丁氧羰基-N-烯血吸蟲Elisa
枯草芽孢桿 2-異基-4,5-二甲基-1H-咪唑藍(lán)氏賈第蟲Elisa
地衣芽胞桿 1-Boc-4-溴-1H-吡唑痢疾阿米巴Elisa
三線鐮孢 Boc-D-2,4-二氯苯氨酸包蟲病Elisa
爪哇根霉 磺達(dá)肝癸鈉隱孢子蟲Elisa
巨大芽孢桿 A 7-溴-1,2,3,4-四氫喹啉鹽酸絲蟲Elisa