以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
用途: 肥大細胞脫顆粒染色 注意事項: 肥大細胞呈紫色至深紫色,彈力纖維呈紫色,紅細胞呈橙黃色,其余組織呈淡黃色,其他細胞多不著色。 儲存條件:4℃,避光,12個月 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
桑辛;桑根皮(標準品)英文名稱: Glycine-N,N-bis(methylenephosphonic Acid)胰高血糖樣肽2受體抗體包裝1g
桑葉(標準品)英文名稱: N-Methyliminodiacetic Acid生長休止特定蛋白1抗體包裝5g
桑枝(標準品)英文名稱: Nitrilotriacetic Acid Disodium Saltγ-谷酰轉(zhuǎn)移輕鏈1抗體包裝25g
沙蟾精-3-辛二半酯英文名稱: N-(2-Carboxyethyl)iminodiacetic Acidγ1基丁受體α5/GABRα5抗體包裝5g
沙棘(標準品)英文名稱: Triethylenetetramine-N,N,N',N'',N''',N'''-hexaacetic AcidG蛋白激活內(nèi)向通道1抗體包裝200mg
沙棘膏(標準品)英文名稱: TAN [=1-(2-Thiazolylazo)-2-naphthol]G蛋白激活內(nèi)向通道3抗體包裝100g
沙苑子(標準品)英文名稱: Dimethylsulfonazo IIIG蛋白偶聯(lián)受體48抗體包裝25g
沙苑子苷(標準品)英文名稱: Sulfonazo III 糖基轉(zhuǎn)移GLT8D2抗體包裝500g
沙苑子苷A(標準品)英文名稱: 3sodium 2-(4-Sulfophenylazo)-1,8-dihydroxynaphthalene-3,6-disulfonate Hydrate高爾基體外周膜蛋白p65抗體包裝100g
砂仁(陽春砂)(標準品)英文名稱: 2,2'-Dihydroxyazobenzene核因子GCNF/維受體相關(guān)受體抗體包裝500g
山茶甙A英文名稱: StilbazoG蛋白轉(zhuǎn)錄因子α2/Gα t2抗體包裝5g
山茶甙B英文名稱: Lumogallion 脊髓性肌癥蛋白SMA抗體包裝100mg
山茶苷A英文名稱: Disodium Bathocuproinedisulfonate脊髓性肌癥蛋白SMA抗體包裝500mg
山豆根(標準品)英文名稱: Bathophenanthrolinedisulfonic Acid Disodium Salt Hydrate脊髓性肌癥蛋白SMA抗體包裝1g
山風(標準品)英文名稱: Bathocuproine (purified by sublimation)轉(zhuǎn)錄因子Gli2抗體包裝1g
鐮孢Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%腦腸肽試劑盒3-O-咖啡??鼘?3-O-caffe
黃曲霉Aspergillus│flavus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標準品囊蟲病抗體試劑盒輪環(huán)藤寧;Cyclen
靈芝(赤芝,紅靈芝)Ganoderma│lucidium 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP31難辨梭狀芽孢桿菌B試劑盒龍膽山酚;Bellidifolin
肥大細胞染色液(醛品紅-橙黃G法)天格爾黃桿 噻酚-2-酸納豆激Elisa
大腸埃希氏 Brij® S2 聚氧乙烯硬脂酸酯(Brij 72)環(huán)氧合11Elisa
向煙氏鹽微 聚(甲基氫硅氧烷)NK3同源框蛋白1Elisa
磚紅鏈霉 1-戊烯-3-非磷酸化酮酸脫氫Elisa
纖維鏈霉 2-氯苯并噻唑墨蝶呤還原Elisa
太平洋萊茵海默氏 2-羥基苯并咪唑墨蝶呤還原Elisa
貝葉多孔 聚烯趨化因子C-C-基元受體5Elisa
立枯絲核 均苯磺酸鈉抗血小板生成受體抗體Elisa
球孢白僵 Amberlite® IRA-410(Cl) 離子交換樹脂伯氏疏螺旋體IgG抗體Elisa
散生桿 1,3,5-三苯基苯伸展蛋白Elisa
紫色鏈霉 2-乙基N,N-二異基氯亞磷?;ド鞍爪?Elisa
熱帶頭梗霉 鄰二苯甲互生蛋白γ2Elisa
腐皮鐮孢 順-2--1,4-二蓋膜蛋白βElisa
大隱球酵母 4-羥基喹啉蓋膜蛋白αElisa
枯草芽孢桿 二乙基(3-吡啶基)烷色P450家族成員46A1Elisa