詳細(xì)介紹
商品介紹:
本系列產(chǎn)品均以溶液形式提供,其中Hoechst 33342染液(1mg/ml)(SY0563)為特定濃度的產(chǎn)品,其濃度為1mg/ml。用于細(xì)胞核染色時(shí),推薦工作濃度為0.5-10μg/ml。Hoechst 33342染液(即用型)(SY0499)為濃度經(jīng)過(guò)優(yōu)化的產(chǎn)品,確??梢詽M足各種常規(guī)染色的需要。 Hoechst 33342 是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光,對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33342 常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。也可以用于普通的細(xì)胞核染色,或常規(guī)的DNA染色。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
10ml | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
骨成型蛋白10(BMP10)英文名稱:BMP10 ELISA Kit前列環(huán)合成抗體包裝500g
谷胱甘肽過(guò)氧化1(GPX1)英文名稱:GPX1 ELISA Kit軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗體包裝5g
谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移ω1(GSTω1)英文名稱:GSTω1 ELISA KitT淋巴CD1A抗體包裝50MG
谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移θ2(GSTθ2)英文名稱:GSTθ2 ELISA Kit磷化周期B1抗體包裝25g
谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移θ1(GSTθ1)英文名稱:GSTθ1 ELISA Kit胞漿型磷脂A2抗體包裝5g
谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移α4(GSTα4)英文名稱:GSTα4 ELISA Kit膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白抗體包裝1g
谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移α1(GSTα1)英文名稱:GSTα1 ELISA Kit緊密連接蛋白6抗體包裝100g
谷胱甘肽(GSH)英文名稱:GSH ELISA Kit磷化緊密連接蛋白6抗體包裝25g
谷光甘肽合成(GSS)英文名稱:GSS ELISA Kit著絲粒蛋白T抗體包裝5g
谷轉(zhuǎn)(ALT)英文名稱:ALT ELISA Kit染色體相關(guān)蛋白2抗體包裝1g
谷酰胺2(GLS2)英文名稱:GLS2 ELISA Kit著絲粒蛋白P抗體包裝5g
谷酰胺(GLS)英文名稱:GLS ELISA Kit分裂周期相關(guān)蛋白5抗體包裝250mg
谷酰胺合成(GS)英文名稱:GS ELISA Kit染色體相關(guān)蛋白2抗體包裝1g
谷脫羧2(GAD2)英文名稱:GAD2 ELISA Kit周期調(diào)控因子10抗體包裝250mg
谷脫氫(GDH)英文名稱:GDH ELISA Kit中心體蛋白97kDa抗體包裝100mg
辣椒Colletotrichum│capsici (Syd.) E.J. Butler & Bisby 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品載脂蛋白L1試劑盒亞油酯;Methyl Linolea
白色類諾卡氏菌Nocardioides│albus 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)載脂蛋白H試劑盒油酯;Methyl Oleate
假格里朗蒼白桿菌Ochrobactrum│pseudogrignonense 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品載脂蛋白E試劑盒硬脂酯;Methyl Stearat
Hoechst 33342染液(即用型)豇豆慢生根瘤 4-氯-2,3-二氟心鈉肽Elisa
嗜熱鏈球 2-基-N-乙基乙酰白脂Elisa
新疆鹽地桿屬 2-乙烯苯酸血小板CD41-IgG抗體Elisa
桃色枝頂孢 2-氯-3-甲血小板相關(guān)IgG抗體Elisa
腸桿屬 9-氨基米諾環(huán)鹽酸鹽炭疽桿抗體Elisa
游動(dòng)球?qū)?/span> 6-氨基-3-乙基苯酚鹽酸鹽25羥基膽固Elisa
膠孢 2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯胃脂Elisa
Herbaspirillum canariense 2-氯-4-嘧啶甲酸熱休克蛋白糖蛋白96Elisa
檸檬假絲酵母 3-(3-溴苯基)吡唑干擾-a-2bElisa
*杏葉斑鏈格孢 2-氟肉桂生長(zhǎng)相關(guān)蛋白Elisa
青霉屬 N-Boc-2-乙酸鞘糖脂Elisa
孟氏假單胞 蒽醌-1,8-二磺酸二環(huán)磷酰Elisa
石面單胞 N-1-Boc-N-4-Cbz-2-哌甲酸型肝炎病核心抗原Elisa
摩洛哥芽孢桿 三[2-對(duì)甲苯基吡啶-C2,N‘]銥(III)胰島受體底物1磷酸化Elisa
巨大芽胞桿 1-乙氧羰基吡咯烷-3-酮胰島受體底物2磷酸化Elisa