詳細介紹
商品介紹:
用途: 檢測細胞自噬 儲存條件:-20℃,避光,12個月 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面:
細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
肉蓯蓉苷A(標準品)英文名稱: 4'-Hydroxyazobenzene-4-carboxylic Acid HydrateS轉(zhuǎn)移κ抗體包裝50g
肉豆蔻(標準品)英文名稱: Carboxymethoxylamine Hemihydrochloride半乳糖激1抗體包裝1g
肉豆蔻木脂(標準品)英文名稱: Girard's Reagent P糖原蛋白2抗體包裝5g
肉豆蔻,十四烷(標準品)英文名稱: 4-Phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione磷半乳糖尿苷轉(zhuǎn)移1抗體包裝1ml
肉桂(標準品)英文名稱: N-tert-Butyl-α-phenylnitrone糖原蛋白1抗體包裝5g
肉桂(標準品)英文名稱: 16-DOXYL-stearic Acid Free Radical葡萄糖合成2抗體包裝250mg
肉桂(標準品)英文名稱: CLA谷草轉(zhuǎn)2抗體包裝10g
肉桂(標準品)英文名稱: MCLA葡萄糖-6磷脫氫抗體包裝250g
肉桂葉(標準品)英文名稱: FCLA Free Acid葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白5抗體包裝50g
乳香(標準品)英文名稱: Red-CLA葡萄糖合成1抗體包裝1g
瑞香/祖師麻(標準品)英文名稱: IsoluminolG蛋白修補結構域蛋白8抗體包裝250mg
塞骨(標準品)英文名稱: Bis[3,4,6-trichloro-2-(pentyloxycarbonyl)phenyl] Oxalate甘油激3抗體包裝25g
噻二(標準品)英文名稱: Disodium 8-Amino-1,3,6-naphthalene 3sulfonate Hydrate高爾基體磷蛋白3樣蛋白抗體包裝1g
噻二苷(標準品)英文名稱: Coumarin 102磷化谷受體1抗體包裝5g
賽門苷I(標準品)英文名稱: Coumarin 314G蛋白修補結構域蛋白1抗體包裝1g
葡萄穗霉Stachybotrys│chartarum 質(zhì)量規(guī)格:>98%尿苷二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移1試劑盒蘿卜硫苷;Glucoraphanin
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>98%鳥苷結合蛋白4試劑盒藜蘆基;3,4-Dimethoxybe
肺炎克雷伯氏菌Klebsiella│pneumoniae 質(zhì)量規(guī)格:含量測定鳥苷交換因子試劑盒藜蘆;Veratraldehyde
細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)黑曲霉 檸檬酸鋰 四水合物磷酸化外紡錘體樣蛋白1Elisa
香菇 2,5-二氟-4-羥基苯甲鳥苷酸交換因子Elisa
明尼蘇達被毛孢 6-羧基四甲基羅丹明 for fluorescence,嘌呤能受體P2Y11Elisa
武夷小單孢 1-Boc-3-基血管緊張Ⅰ受體抗體Elisa
北京芽孢桿 1-BOC--4-甲酰載脂蛋白L2Elisa
米曲霉 6-氯-2-甲基吡啶-3-酸蛋白酪氨酸磷酸OElisa
類諾卡氏 3-溴-2-羧酸乙酯核糖核蛋白BElisa
蠅鵝膏 基乙鳥苷酸Elisa
泡囊短波單胞 3-(N-Boc-氨基)氮雜丁烷類泛蛋白Elisa
大腸埃希氏 D-二異酯非磷酸化酮酸脫氫Elisa
Pseudarthrobacter 2-丁氧基苯酸前膠原賴氨酸-1,2-酮戊二酸-5-雙加氧1Elisa
弗雷德里克斯堡假單胞 2-氯乙基乙血小板糖蛋白VElisa
大腸桿 5-氯戊血小板衍化生長因子DDElisa
康氏木霉 Fmoc-L-精氨酸激活受體樣激1Elisa
蒼白鹽八疊球 6-氯煙酰四旋蛋白2Elisa