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詳細介紹
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢測試劑盒
英文名稱：Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格：50次
發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹：
本試劑盒是一種采用Annexin-PE與7-AAD雙染法進行細胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。 細胞凋亡早期改變發(fā)生在細胞膜表面，這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜內轉移到細胞膜外，使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂，正常主要存在于細胞膜的內面，在細胞發(fā)生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結合到磷脂類如PS的特性，對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉移到細胞膜外不是凋亡所*的，也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就被破壞。7-AAD是一種核酸染料，可進入死細胞內與DNA結合，能夠對壞死和凋亡晚期的細胞進行染色。7-ADD與PI有著相似的熒光特性，但其發(fā)射波譜較PI窄，對其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的佳替代品，因此通常將Annexin V-PE與ADD配合染色，以區(qū)別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡的晚期細胞。 操作步驟： 1、細胞樣品的準備： a．對于貼壁細胞：小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內備用。用胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。 b．對于懸浮細胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5毫升離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。 2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去離子水)。 3、用250μl Binding Buffer重新懸浮細胞，調節(jié)其濃度為1×106/ml。 4、取 100μl 的細胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-PE 和 10μl 7-AAD 溶液。 5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。 6、在反應管中加400μl PBS，流式細胞儀(FACS)分析。 Jurkat細胞用順鉑誘導凋亡后用Annexin V-PE/7AAD雙染流式分析圖譜 儲存條件：2～8℃，避光保存 |
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
抗促狀腺受體抗體(TRAb)英文名稱：TRAb ELISA Kit腺相關病5 VP1抗體包裝5MG
抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)英文名稱：α-Fodrin IgG/IgA ELISA Kit脂肪脫氫抗體包裝100g
抗Smith抗體(Sm)英文名稱：Sm ELISA Kit抗利尿激1A抗體包裝25g
卷曲螺旋域結合蛋白80(CCDC80)英文名稱：CCDC80 ELISA Kit抗利尿激受體1B抗體包裝5g
巨噬細胞移動因子(MIF)英文名稱：MIF ELISA Kit二磷腺苷核糖基化因子鳥嘌呤核苷交換因子2抗體包裝1g
巨噬細胞移動抑制因子(MIF)英文名稱：MIF ELISA Kitα增強子結合蛋白1抗體包裝5g
巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)英文名稱：MIP-5 ELISA Kit脊髓小腦共濟失調10抗體包裝250mg
巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)英文名稱：MIP-3β/ELC/CCL19 ELISA Kit蛋白激A錨定蛋白7抗體包裝1g
巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)英文名稱：MIP-3α/CCL20 ELISA Kit腺苷三磷結合盒轉運體12抗體包裝5g
巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)英文名稱：MIP-2 ELISA Kit腺苷三磷結合盒轉運體9抗體包裝25g
巨噬細胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)英文名稱：MIP-1δ/CCL15 ELISA Kit三磷腺苷結合盒轉運蛋白4抗體包裝5g
巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)英文名稱：MIP-1β/CCL4 ELISA Kit肌動蛋白結合蛋白LIM3抗體包裝100g
巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP1α)英文名稱：MIP1α ELISA Kit高爾基復合體相關蛋白1抗體包裝25g
巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)英文名稱：MDC/CCL22 ELISA Kit乙酰羧化1ACCα抗體包裝100mg
巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)英文名稱：M-CSF ELISA Kit腺嘌呤核苷轉運蛋白1、2、3、4抗體包裝1g
磷化蛋白激B抗體促腎上腺皮質激(ACTH)L-685458是一種有效的淀粉樣β蛋白前體γ分泌抑制劑, IC50為17 nM,比作用于其他天冬酰蛋白選擇性高50-100倍。
Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢測試劑盒小單孢 3-氯-5-多巴D2受體檢測試劑盒
ATP 熒光儀 3-溴-4-氧代-1-羧酸叔丁酯多功能蛋白聚糖檢測試劑盒
大腸埃希 3-溴-5-氯苯甲多環(huán)芳烴-DNA加合物檢測試劑盒
乳酒假絲酵母 3-溴-5-氟苯甲多聚ADP核糖聚合酶檢測試劑盒
南海區(qū)交替紅色桿 N,N-二甲基硫代氫酰基烷磺酸鈉多配體蛋白聚糖4檢測試劑盒
路氏腸桿 6-硝基-2-甲多效生長因子檢測試劑盒
枯草芽孢桿 環(huán)酸葉酯多形核白彈性蛋白酶檢測試劑盒
融粘帚霉 4-氟-3'-二苯多藥耐藥相關蛋白檢測試劑盒
F56（蘑菇） 4-甲氧基鄰苯二甲酸多藥耐藥相關蛋白1檢測試劑盒
黃薄芝 異丁酸乙基香蘭酯惡性腫瘤特異性生長因子檢測試劑盒
食苯芽胞桿 2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]-5-庚烯-2-羧酸叔丁酯腭肺鼻上皮癌相關蛋白檢測試劑盒
大腸埃希 2-氨基-5-甲氧基苯甲酰兒茶酚 檢測試劑盒
肉色曲霉 四丁基銨兒茶酚抑素檢測試劑盒
中溫富鹽 N-芐氧羰基乙二氧化酶檢測試劑盒
深褐褶 2-氯-6-吡啶-3-二級組織趨化因子檢測試劑盒
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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